一、實驗目的要求
1 了解土壤微生物的分離純化及測數的基本原理。
2 學習並掌握微生物分離純化技術方法。
3 學習並掌握微生物平板菌落計數的技術方法。
二、基本原理
土壤是微生物生活的大本營,其中含有大量不同類型的微生物,可按照一定的方法將各類微生物通過分離進行純培養,並能對特定類群進行數量測定。基本原理是通過稀釋使菌體細胞充分分散,單細胞得以生長發育形成菌落,可使用稀釋法或平板劃線法進一步純化,還可通過平板菌落計數,推算單位重量土壤樣品含有微生物的數量。
三、實驗步驟
(一)土壤樣品采集
在待測田塊上,若田塊麵積小於50平方米則按對角線三點采樣,若田塊麵積大於50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點於耕作層0--20cm,先除去表土1--2cm,以無菌鏟采土足量充分混勻後用無菌塑料袋分裝。
(二)好氣性細菌的分離純化及測數
1.製備土樣稀釋液
吹吸三次混勻
無菌操作
另留一管不稀釋留作對照(CK)
2.培養基的準備
融化牛肉膏蛋白腖培養基,融化後保溫在48℃。並取6個無菌培養皿,分別在皿底貼好標簽,注明10-5、10-6、CK(每個稀釋度要兩個平行皿,對照要兩個平行皿)。
3.傾注法接種
先按10-6,10-5的順序將不同稀釋度菌懸液接入對應平皿中(每個平皿接入1ml),再向每個平皿傾注約15 ml的牛肉膏蛋白腖培養基(48℃)待冷凝,混合均勻。
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