一、目的和要求
1、了解采集土樣的要求和方法。
2、掌握由土壤中分離稀有放線菌的基本原理和操作技術。
3、學習並掌握土壤稀釋法和微生物的純培養技術。
4、學習並掌握抗生菌的鑒別方法。
二、原理
篩選放線菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止，已發現的抗生素有80%皆來自於放線菌。放線菌主要存在於土壤中，並在土壤中占有相當大的比例。一般地，放線菌在比較幹燥、偏堿性、含有機質豐富的土壤中數量居多。通常，隨著地理分布、植被及土壤性質的不同，放線菌的種類、數量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營，其中的放線菌多以鏈黴菌為主，因此人們通常將除鏈黴菌以外的其它放線菌統稱為稀有放線菌。若以常規方法進行分離，得到的幾乎全部是鏈黴菌。然而，當采用加熱處理土樣、選用特殊培養基或添加某種抗生素等方法時，均可提高稀有放線菌的獲得率。由土壤中分離放線菌的方法很多，其中包括稀釋法、彈土法、混土法和噴土法等，本實驗主要采用稀釋法，並通過選用特殊培養基的方法，來獲得少量稀有放線菌。
由土壤中分出的放線菌需進一步鑒別是否為需要的抗生菌。首先應根據篩選目的確定試驗模型，然後利用培養基平板進行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。其主要依據是擴散原理，即觀察在抗生菌周圍是否會出現明顯的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度則表明了該菌株抗菌活性的強弱。本實驗選用了這兩種方法。
三、實驗材料
1、培養基：葡萄糖天門冬素瓊脂，精氨酸瓊脂，高氏1號瓊脂，以上每種培養基皆用500ml三角瓶分裝250ml。
2、滅菌物品：牛皮紙袋，培養皿，1ml、5ml吸管，250ml三角瓶分裝90ml無菌水（含30粒玻璃珠），18×180mm試管分裝9ml無菌水，牙簽，玻璃刮鏟，18×180mm試管中分裝10 ml 1‰K2Cr2O7母液。
3、試驗菌：
（1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
（2）大腸杆菌（Escherichia coli）
（3）金黃色葡萄球菌（Staphlococcus aureus）
（4）深紅酵母（Ruodotorula rubra）
4、其它：采土鏟，細目篩，藥勺，稱量紙，試管架，小天平，記號筆，打孔器，遊標卡尺、鑷子，圓濾紙片，15×150mm試管分裝5ml無菌水，1ml吸管，無菌漏鬥。
四、實驗實施
五、結果及分析
上一篇：真菌檢驗技術的進步
下一篇：酵母RNA的分離
