大腸杆菌目標蛋白的誘導及總蛋白檢測（含T7表達係統如BL21菌株中的pET係列表達體係）：
誘導蛋白表達：
1．取過夜培養物50ul-200ul接種於5ml含抗生素的Universal瓶中
2．37度搖2小時左右
3．取一定體積的菌液做陰性對照，其餘的加IPTG至終濃度為0.2mM（可變）（4ml培養基加80mM的IPTG10ul）
4．37度搖2小時左右
檢測蛋白表達：
5．取100ul（或更多）培養物，用pH值為7.4的20mM Tris-HCl（或PBS 7.4）濃縮10倍或5倍。（菌體多時也可不濃縮）
6．加等體積的2倍上樣液（Sampling Buffer），或1／9體積10倍上樣液。（加上樣液之前後最好將菌體盡量打散，可防止菌體不能完全破裂，還可加入1M的DTT至終濃度50mM防止加熱時二硫鍵的形成。）
7．100度煮2-4分鍾
8．12000rpm，離心1min（菌體破碎完全時也可不做）
9．取上清點樣做SDS-PAGE
部分試劑：
1．蛋白上樣buffer(2倍)（10ml）：
SDS 0.2g，溴酚藍0.0006g，1M Tris-HCl (pH=6.8) 0.8ml，glycerol 1.5ml。
2．蛋白上樣buffer(10倍)（10ml）：
SDS 1g，1MTris-HCl (pH=6.8)2.5ml，溴酚藍0.003g，glycerol 4ml。
3．1M DTT（二硫蘇糖醇）
3.09g DTT溶於20ml 0.01mol／l 乙酸鈉，過濾除菌，分裝，-20度儲存。
上一篇：大腸杆菌DNA純化
下一篇：菌落PCR的方法
