【實驗目的】學習培養和分離酵母菌的技術和方法
【實驗原理】
大多數酵母菌為腐生，其生活最適pH為4.5一6，常見於含糖分較高的環境中，例如果園土、菜地土及果皮等植物表麵。酵母菌生長迅速，易於分離培養，在液體培養基中，酵母菌比黴菌生長得快。
利用酵母菌喜歡酸性環境的特點，常用酸性液體培養基獲得酵母菌的培養液（這樣做的好處是酸性培養條件則可抑製細菌的生長），然後在固體培養基上用劃線法分離之。
【實驗材料和用具】
1、甘蔗、成熟葡萄或蘋果等果皮、0.1%美藍染液、1ml的無菌吸管、無菌培養皿等。
2、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基：
原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸餾水（1000ml）。
配製方法：
（1）先將馬鈴薯去皮，切片，稱200克並加蒸餾水1000ml，煮沸半小時，用紗布過濾，補足蒸餾水量至1000ml ，製成20%的馬鈴薯汁。
（2）在20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂，煮沸溶化，補足水分並在115攝氏度條件下高壓滅菌20分種。
（3）加入葡萄糖，製成培養酵母菌的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。
3、乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液：配方同上，但不加瓊脂而加乳酸，按每1000ml培養液中含5ml乳酸的量加入，並分裝試管。
【實驗步驟】
l、接種：取一小塊果皮，不需衝洗，直接接入乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液管中，置28一30℃，培養24小時，可見培養液變混濁。
2、培養，用無菌吸管取上述培養後培養液0.lml，注入另一管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液中，置28-30℃再培養24小時或稍長(過長則黴菌長出)。
3、觀察：用無菌操作法取少許菌液置於載玻片中央的0.l%美藍染色液中，混勻後加蓋玻片製成水浸片，先用低倍鏡後換高倍鏡觀察酵母菌的形態和出芽生殖情況。
活酵母菌可使美藍還原，從而使菌體不著色，用此方法可判斷酵母菌的死活。
4、分離：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基溶化後製成平板。用劃線法分離酵母菌培養液，從而得到單個菌落。挑取單個菌落反複再次劃線分離純化，最終可獲得純培養。
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