【材料】
1. 動物:體重200~250克豚鼠2隻
2. 結核杆菌培養物或結核病人檢驗材料(痰、尿、糞、腹水等材料經濃縮集菌)
3. 注射器及消毒用材料等。
【方法】
1. 選取結核菌素試驗為陰性的豚鼠兩隻。
2. 吸取結核杆菌懸液或病人檢材,注入豚鼠腹股溝皮下0.1ml
3. 注射後每周定期檢查一次,觀察豚鼠腹股溝淋巴結是否腫大,局部變硬,化膿及體重減輕、體溫升高等症狀。
4. 給豚鼠作結核菌素試驗,是否出現陽性結果。
5. 6周後,將豚鼠進行解剖,觀察淋巴結是否腫大,有無幹酪性病變,肝、脾、肺等是否腫大,表麵有無灰白色結節病灶,取可疑病灶進行塗片染色鏡檢和分離培養。若為陽性結果,可報告“動物接種後××天查到有結核菌感染”。如無症狀及病變者,可報告為陰性。
結核杆菌濃縮集菌法(以處理痰標本為例)
材料:結核病人24小時痰液,細口瓶,0.02%酚紅液、汽油,NaOH,無菌生理鹽水等。
(一)漂浮法:
1. 取24小時痰液15毫升,裝入細口瓶內,加入2倍量0.5%NaOH搖勻,高壓滅菌或煮沸20—30分鍾殺菌。
2. 待冷後加入汽油2毫升(二甲苯也可以),用力振蕩20—30分鍾,用生理鹽水加至液麵與瓶口齊,靜置半小時。
3. 取瓶口表麵油狀物塗於載物玻片上,微微加熱,幹後再加,如此重複5—6次,至厚度適宜,烘幹待冷,抗酸染色,油鏡頭檢查。
(二)沉澱法:
1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH,高壓無菌或煮沸20—30分鍾後,加入0.02%酚紅指示劑0.1毫升,劇烈振蕩混勻,亦可置37℃水浴消化30分鍾。
2. 矯正PH為7.0,3000轉/分離心30分鍾,棄去上清液。
3. 取沉澱物塗片染色鏡檢。若進行分離培養和動物接種,可免去高壓滅菌或煮沸的程序。
《附錄》
抗酸染液的配製
1. 石炭酸複紅液:稱取鹼性複紅4克,溶於95%酒精100毫升中成飽和液。再取飽和液10毫升與5%石炭酸溶液90毫升混勻即成。
2. 3%鹽酸酒精:取濃鹽酸3毫升,95%酒 97毫升混合。
3. 呂弗勒氏鹼性美蘭液:稱取美蘭2克,溶於95%酒精100毫升中,配成飽和液,取飽和液30毫升,再加入蒸餾水100毫升及10%氫氧化鉀水溶液0.1毫升即成。
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