各國細胞庫支原體汙染的統計表
國家 受支原體汙染(%) 報告年度
USA-FDA 15 1993(past 30 years)
USA-ATCC 15-20 1992
Japan-(IFO,RIKEN,JCR 80~30~22 1981 1987-19931998
Germany-DSM 36 1990-1994
Argentina 65 1987
Israel 32 1986-1993
China 95 1990
造成支原體高汙染率的原因為:
1.支原體size 0.1~0.8 um,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um)
2.支原體汙染時,沒有明顯的肉眼或一般光學顯微鏡可觀察到的特征變化
3.過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式
4.細胞流通間缺乏品管,造成實驗室間的相互汙染
5.研究或操作人員忽略汙染問題
支原體汙染了來源:
1. 已受汙染的細胞
2. 操作人員的疏失
3. 已受汙染的培養基、血清
4. 操作環境不良、實驗器具不潔等
由於支原體為人體口腔中之正常菌叢,實驗室之操作人員的汙染亦可能為汙染源,須十分注意。而萬一細胞已受支原體汙染時,最佳的處理原則為將細胞高壓滅菌後丟棄,以免汙染其它潔淨的細胞株。但是若是堅持要作去除支原體汙染,有以下幾種方法,隻不過結果會與原始的細胞特性有差異。
去除支原體汙染:
1. 抗生素處理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer)
2. Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine
3. Anti-sera
預防與控製方麵可從以下各點加強注意:
設備方麵:
1. 使用已作支原體測試ok之細胞株
2. 於另一隔離之區域操作未知是否有支原體汙染之細胞
3. 使用不添加抗生素的培養基培養細胞
檢測方麵:定期以標準的支原體檢測方法檢測細胞、培養基、血清、ddH2O有否被支原體汙染。
實驗操作人員之無菌觀念與無菌操作技術之要求
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