細菌轉化實驗原理和操作步驟

 

一． 實驗目的 
1 ．以 pGLO 質粒轉化大腸杆菌為例，學習轉化的基本原理及方法。 
2 ．驗證 DNA 是遺傳物質，加深對中心法則的理解。 
  
二．實驗原理 
轉化（ transformation ）是指一段同源或異源的 DNA 轉入受體細胞並得到表達的水平基因的轉移過程，是現代分子生物學研究和基因工程不可缺少的重要技術。目前常用的轉化方法有 CaCl 2 法 ( 化學轉化法 ) 和電轉化法。本實驗是用 pGLO 細菌轉化試劑盒中提供的 pGLO 質粒來轉化大腸杆菌，所用方法為 CaCl 2 轉化法。 


pGLO 質粒：
pGLO 質粒上主要含有兩個基因，一個為編碼綠色熒光蛋白 (GFP) 的基因，一個為抗生素氨苄青黴素抗性基因。此外，該質粒還整合有一個特殊的參與受體細胞中綠色熒光蛋白表達的基因調控體係，轉化細胞中的綠色熒光蛋白基因隻有在培養基中存在阿拉伯糖時才能啟動表達。轉化子細胞將在不含阿拉伯糖的培養基上呈白色而在含阿拉伯糖的培養基上顯綠色熒光，這種熒光在長波紫外燈下即可觀察到。 

三． 實驗材料 受體菌： E.coli K12 HB101 
質粒： pGLO plasmid 
轉化液（ CaCl2 ） 
氨苄青黴素（ amp ） 
阿拉伯糖（ ara ） 
培養基：固體 LB 、液體 LB 
接種環、移液器等 
四． 實驗步驟 
1. 準備平板： 每組： 1 塊 LB 平板， 2 塊 LB/amp 平板， 1 塊 LB/amp/ara 平板 
2. 準備感受態細胞：用 250 μ l 無菌水或轉化液懸浮試劑盒中提供的大腸杆菌菌粉，此即感受態細胞。 
3. 活化受體細胞：挑取 1 環 E.coli K12 HB101 菌液，於 LB 培養基上 37 ℃ 活化 16-24h 。 
4. 轉化：