基因工程菌株的培養與觀察

 

大腸杆菌是含有長約3000Kb的環狀染色體的棒狀細菌，它能在僅含碳水化合物（如葡萄糖，提供碳源和能量）和提供氮、磷、微量元素的無機鹽的極限培養基上快速生長。如果用含氨基酸、核苷酸前體、維生素以及其它一些細菌不能合成的代謝成分的豐富培養基來培養，那麽大腸杆菌會生長的更快。大多數應用於DNA重組技術的細菌是大腸杆菌K-12株的衍生菌株。

 

當大腸杆菌在液體培養基中培養時，其開始裂殖前，先進入一個生長滯後期。在豐富培養基中，它能在20-30min內複製一代，這種指數生長相稱之為對數期。最後，當培養基中的營養成分和氧耗盡或當培養基中廢物的含量達到抑製細菌的快速生長的濃度時，菌體密度就達到一個比較恒定的值。在通常的實驗室培養中，在這一時期的細胞密度一般為1*10⁹—2*10⁹ml，細胞停止迅速分裂。這就是細菌生長的飽和期，而所謂的新鮮飽和即指當培養液中細胞密度剛到達這一水平。

 

培養特征是指微生物在培養基上所表現的群體形態和生長情況。細菌培養特征的常規檢驗包括平麵上的菌落特征，液體培養時的生長特征以及斜麵培養上的菌苔特征。菌落是個體微生物在固體培養基上生長繁殖成的肉眼可見的群落。在一定的培養條件下，不同的細菌形成的菌落形狀是不一樣的。

 

超淨工作台酒精燈無菌培養皿及試管 接種環 無菌牙簽 塗布棒DH5α菌株

LB液體培養基：每升含10g胰蛋白腖、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH

LB固體培養基：每升含10g胰蛋白腖、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH、15g瓊脂糖

（一）在固體培養基中培養

將已熔化的LB固體培養基冷涼到50℃左右（即熱而不燙手），按無菌操作倒入無菌培養皿內，冷卻凝固成平板，將塗布棒的三角部分浸沒於酒精中，取出後再通過燈焰，點燃其上的乙醇，待塗布棒上的火焰熄滅後，將其觸碰無菌瓊脂平板的表麵使其冷卻。然後，取少許菌液（100uL）滴在平板上，用塗布棒作圓周運動將菌液塗布均勻，待平板幹後於37℃倒置培養過夜。待菌落長出後，觀察菌落特征

（二）在液體培養基中培養

取5mL液體培養基加入一支無菌試管中，用無菌牙簽挑一個單菌落浸沒於培養液中並輕輕振動，使待接種的細菌分散在培養液中，蓋好試管，在搖床上以60r/min於37℃培養至飽和（約6h），觀察液體培養物是否混濁。利用分光光度計監測，按每0.1 OD值大約相當於10⁸細胞/mL計算細菌濃度。