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組織培養一般分為五個步驟:



錄入時間:2011-7-11 14:56:05 來源:互聯網

1)培養基的配製
培養基的成份隨植物的種類、外植體的類型、培養階段的不同而不同。一般來說,培養基應含有大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、激素、糖和瓊脂等物質,有時還在培養基中添加有機附加物,如活性炭、椰子汁等。培養基的配製按如下步驟進行:
(1)根據培養材料確定培養基。一般可先試用MS培養基,若不適,再改用其它培養基。
附:MS培養基——A組:(大量元素)(單位:mg·L-1,下同)
NH4NO3 1650 ;KNO3 900 ;CaCl2 440 ;MgSO4·7H2O 370;KH2PO4 170
B組:(微量元素)
KI 0.83 ;H3BO3 6.2 ;MnSO4·H2O 22.3 ; ZnSO4·7H2O 10.6
C組:
Na2MoO4·2H2O 0.25 ;CuSO4·5H2O 0.025  ; CoCl2·6H2O 0.025
D組:
EDTA 37.3  ; FeSO4·7H2O 27.8
E組:(有機物)
甘氨酸(C2H5NO2) 2.0 ; 鹽酸硫胺素(VB6) 0.1 ; 煙酸 0.5
吲哚乙酸(VB1) 1-30 ; 鹽酸吡哆醇 0.5 ; 6-苄基氨基腺嘌呤(6-BA) 0.04-10 ; IAA(吲哚乙酸) 0.01-3
其他溶液的配製:1mol/L的NaOH溶液,0.1mg/mL的6-BA溶液,0.1mg/mL的IAA溶液,0.1mg/mL的2,4-D溶液,0.1mg/mL的KT溶液,0.1mg/Ml的ZT溶液。
(2)按照確定的培養基配方配製培養基,一般包括溶化瓊脂、加入蔗糖和母液、調整酸堿度、定容、分裝等步驟。
(3)對分裝好的培養基進行高壓滅菌,將滅菌好的培養基放入接種室中。
2)無菌培養物的建立
(1)外植體的切取及消毒。用於快速繁殖的外植體可以是種子、莖尖、葉片、花序等。外植體必須先進行消毒,其消毒方法是:從植株上切取所需的部分,用水衝洗幹淨,而後移入超淨工作台中用消毒劑(次氯酸鈉、氯化汞、酒精等)進行消毒,但不管使用什麽消毒劑,消毒後的外植體應該是無菌的,而其本身沒有被消毒劑殺死。
(2)將消毒後的外植體接種到培養基中,接種時要求迅速準確,防止交叉汙染。
3)中間繁殖體的誘導和增殖
消毒後的外植體在培養基上培養一段時間後可誘導出從芽、胚狀體、原球莖、根狀莖,這些培養材料稱為中間繁殖體。對中間繁殖體進行切割、繼代培養就可以進行中間繁殖體的增殖。中間繁殖體的增殖速度隨花卉的種類、培養基、培養條件的不同而異,因而對具體花卉需進行試驗,找到合適的繁殖條件,以達到“快繁”的目的。
4)生芽、壯苗與生根
當中間繁殖體增殖到一定數量後快速繁殖進入生芽、壯苗和生根階段。如果是通過從芽繁殖,則不需經過生芽直接進行壯苗、生根,如果是通過其它途徑則需先將中間繁殖體轉移到生芽培養基上,然後再轉移到壯苗生根培養基上。在壯苗生根培養基上,大多數花卉要分離成單苗。
5)試管苗移栽和管理
對已經生根的試管苗及時移栽是花卉快繁的最後工作,而且也是十分關鍵的工作。由於試管苗是在無菌、有營養供給、適合光照、溫度和100%相對濕度環境中生長的,因而剛出瓶的試管苗對外麵環境不太適應,稍一不慎便會造成大量死苗。所以對剛出瓶的試管苗要給予特別的照顧,適當的溫度、弱光照、高的空氣濕度、適宜的基質及對病蟲害的有效控製是提高成活率的關鍵。

 

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