厭氧菌培養方法

厭氧菌是自然界中分布廣泛、性能獨特的一類微生物, 專性厭氧菌因其細胞內缺乏超氧化物歧化酶、過氧化氫酶或過氧化物酶,因此無法消除機體在有氧條件下產生的有毒產物——超氧陰離子自由基，故這類微生物極易受氧毒害。專性厭氧微生物即使短暫地把它暴露於空氣中,也會引起損傷致死。因此對它們進行分離、培養和研究時,就必須有一套相應的培養分離方法。

 

1、了解厭氧菌培養常用方法：皰肉培養法、焦性沒食子酸法、厭氧罐法、厭氧箱法、厭氧培養袋法等。

2、掌握結核杆菌的形態特點，熟悉結核杆菌的培養特性。

3、掌握抗酸染色的原理及操作過程。

4、了解結核杆菌標本的采集、培養前處理及製片。

 

皰肉培養基、厭氧罐、厭氧箱、厭氧培養袋、焦性沒食子酸、NaOH、脫脂棉等

 

厭氧菌培養方法：包括物理、化學和生物學方法（總之為厭氧菌培養形成一種無氧環境）

 

1. 厭氧罐法：

厭氧產氣袋加入水後會產生氫氣和二氧化碳，氫氣在厭氧催化劑（冷觸酶鈀粒鈀粒由粉紅色變成淺蘭色而失效，160℃2h，即可恢複其活力而重複使用）的作用下，與氧結合生成水，可在30分鍾內將氧含量降至1%以下。二氧化碳可以促進厭氧菌的生長。罐內放有煮沸去氧的美蘭指示劑一管。 [每次要新鮮配製，在試管內將亞甲藍(0.5%亞甲藍3ml加水至100 ml)、6%葡萄糖和氫氧化鈉(1/10 mol/L NaOH 6 ml加水至100 ml)3種溶液等量混合並煮沸還原至無色，立即將指示劑管放入預先裝好培養物的罐內。如果能在孵育的整個過程中維持厭氧條件，則指示劑溶液將無色，否則指示劑則變色。亞甲藍有氧為藍色，無氧為無色。] 亞甲藍作為一種氧化還原指示劑。

 

2.焦性沒食子酸法：

焦性沒食子酸+NaOH→焦性沒食子橙（黑、褐色）[吸收遊離的氧氣]。

培養皿法用培養皿蓋，鋪上一薄層滅菌脫脂棉，將1g焦性沒食子酸放於其上。用肉膏蛋白陳瓊脂培養基倒平板，待凝固稍幹燥後，在平板上一半劃線接種巴氏芽孢梭菌，下一半劃線接種熒光假單胞菌，並在皿底用記號筆作好標記。滴加10％NaOH溶液約0.5ml於焦性沒食子酸上，切勿使溶液溢出棉花，立即將已接種的平板覆蓋於玻璃板上或培養皿蓋上，必須將脫脂棉全部罩住，焦性沒食子酸反應物切勿與培養基表麵接觸，以溶化的石蠟密封皿底與玻璃板或皿蓋的接觸處。置37℃溫箱培養24～48h。

 

3.厭氧培養箱法：

由厭氧環境操作箱、恒溫培養箱、高度真空傳遞箱等組成，能任意輸入所需氣體，準確調節流量，以滿足厭氧菌生長需要。