一、目的要求
1．學習測定水中大腸菌群數量的多管發酵法；
2．了解大腸菌群的數量在飲水中的重要性。
二、基本原理
多管發酵法包括初（步）發酵試驗、平板分離和複發酵試驗。
初（步）發酵試驗：利用大腸菌群能發酵乳糖而產酸產氣的原理，但初發酵管24h內產酸產氣和48h產酸產氣的均需進行平板分離。
平板分離：采用伊紅美藍瓊脂平板，使大腸菌群產生帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落。
複發酵試驗：以上陽性菌落，經染色為革蘭氏陰性無芽孢菌者，再次進行初發酵試驗，經24h培養產酸產氣的，最終確定為大腸菌群陽性結果。
三、器材
1、培養基：乳糖蛋白腖發酵管（內有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白腖發酵管（瓶）（內有倒置小套管），伊紅美藍瓊脂平板，滅菌水。
2、儀器或其他用具：載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。
四、操作步驟
1．水樣的采取
2．自來水檢查
（1）初（步）發酵實驗
將水樣分別接入三倍濃縮乳糖蛋白腖發酵管（瓶）中，37℃培養24h，24h未產氣的繼續培養48h。
（2）平板分離
將經24h和48h培養後產酸產氣的發酵管（瓶），分別劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板上，再於37℃培養18～24h，將符合下列特征的菌落進行染色鏡檢。
深紫黑色，有金屬光澤；
紫黑色，不帶或略帶金屬光澤；
淡紫紅色，中心顏色較深。
（3）複發酵試驗
將鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢菌的菌株重複初步發酵試驗。並根據初發酵管試驗的陽性管（瓶）查表1，即得大腸菌群數。
3．池水、河水或湖水等的檢查
分別將100ml、10ml、1ml原水樣和經稀釋成10－1、10－2的水樣重複上述自來水的檢查，其中100、10、1、10－1ml水樣的發酵結果查表2，10、1、10－1、10－2ml水樣的發酵結果查表3，即得大腸菌群數。
五、思考題
1．大腸菌群的定義是什麽？
2．假如水中有大量的致病菌——霍亂弧菌，用多管發酵技術檢查大腸菌群，能否得到陰性結果？為什麽？
3．EMB培養基含有哪幾種主要成分？在檢查大腸菌群時，各起什麽作用？
4．經檢查，水樣是否合乎飲用標準？
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