幽門螺旋杆菌（Hp）的特征、培養及診斷

 

幽門螺杆菌，Helicobacter pylori，簡稱Hp。首先由巴裏·馬歇爾(Barry J. Marshall)和羅賓·沃倫(J. Robin Warren)二人發現，此二人因此獲得2005年的諾貝爾生理學或醫學獎。

 

幽門螺杆菌是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌。長2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。革蘭染色陰性。有動力。在胃粘膜上皮細胞表麵常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養基上生長時，除典型的形態外，有時可出現杆狀或圓球狀。

 

電子顯微鏡下，菌體的一端可伸出2～6條帶鞘的鞭毛。在分裂時，兩端均可見鞭毛。鞭毛長約為菌體1～1.5倍。粗約為30nm。鞭毛的頂端有時可見一球狀物，實為鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可見一個圓球狀根基伸入菌體頂端細胞壁內側。在其內側尚有一電子密度降低區域。鞭毛在運動中起推進器作用，在定居過程中起拋錨作用。

 

幽門螺杆菌是微需氧菌，環境氧要求5～8%，在大氣或絕對厭氧環境下不能生長。許多固體培養基可作幽門螺杆菌分離培養的基礎培養基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補充物方能生長。常以萬古黴素、TMP、兩性黴素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。

 

幽門螺杆菌對臨床微生物實驗中常用於鑒定腸道細菌的大多數經典生化實驗不起反應。而氧化酶、觸酶、尿素酶、堿性磷酸酶、r－穀氨酰轉肽酶、亮氨酸肽酶這七種酶反應是作為幽門螺杆菌生化鑒定的依據。

 

幽門螺杆菌的全基因序列已經測出，其中尿素酶基因有四個開放性讀框，分別是UreA、 UreB、 UreC 和UreD。UreA和UreB編碼的多肽與尿素酶結構的兩個亞單位結構相當。幽門螺杆菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當於變形杆菌的 400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨雲保護細菌在高酸環境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分別編碼空泡毒素和細胞毒素相關蛋白。

 

根據這兩種基因的表達情況，又將幽門螺杆菌菌株分成兩種主要類型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因並表達兩種蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表達兩種蛋白，尚有一些為中間表達型，即表達其中一種毒力因子。現在多認為Ⅰ型與胃疾病關係較為密切。

 

用於培養的胃粘膜活檢標本應置於生理鹽水、營養肉湯或20％葡萄糖中，然後立即轉送到細菌室培養。如果標本不能在4個小時內培養，就應放在4攝氏度保存，但不宜超過24小時。長期保存用於培養的活檢標本的唯一方法是將其置於－70攝氏度或液氮之中。

　

培養幽門螺杆菌的培養基包括非選擇性及選擇性兩種。常用的非選擇性培養基基礎為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白腖大豆瓊脂以及Wilkins- Chalgren瓊脂。培養基中需加7％－10％的去纖維蛋白馬血。羊血、人血、馬血清、氯化血紅素、澱粉、膽固醇或環糊精 (cyclodextrins） 也可代替馬血。選擇培養基則是在上述 培養基中添加一定的抗菌藥物，如萬古黴素、啶酸、二性黴素B、多粘菌素B以及甲氧苄氨嘧啶（TMP）。

 

常用的有Skirrow 配方及Dent 配方。前者原用於彎曲菌的培養，亦可用於幽門螺杆菌培養。後者為前者的改良，即將多粘菌素用頭孢磺啶取代，因為少數（5％左右）幽門螺杆菌菌株對多粘菌素敏感。Drnt配方為萬古黴素（10mg／L）、頭孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性黴素B（5mg／L）。有報道指出，部分菌株對啶酸敏感，因而培養基中應盡量避免作用該抗生素。