一、真菌DNA的提取（方法一）
1.實驗試劑
（1）DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS
（2）3M NaAc
（3）TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA
（4）酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)
（5）氯仿:異戊醇(24:1)
（6）異丙醇
（7）無水乙醇
（8）75%乙醇
（9）RNaseA
2.實驗步驟
（1）取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4mL提取液，快速振蕩混勻
（3）加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇(24:1)，渦旋3～5min（此處是粗提沒有加酚，可以節約成本）
（4）1000rpm，4℃，5min
（5）上清用氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm，4℃離心5min）
（6）取上清，加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇或2.5倍體積的無水乙醇沉澱, 混勻, 靜置約30 min
（7）用毛細玻棒挑出絮狀沉澱，用75%乙醇反複漂洗數次，再用無水乙醇漂洗1次，吹幹，重懸於500ul TE中
（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃處理1h
（9）用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）
（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V體積的無水乙醇，-70℃沉澱30min以上
（11）沉澱用75%乙醇漂洗，風幹，溶於200ul TE中，-20℃保存備用
上一篇：真菌的一般形態觀察
下一篇：真菌的DNA和RNA提取方法（2）
