秋石斛蘭的組織培養

   以秋石斛蘭優良種質，利用新芽為外植體，采用獨特的培養基進行叢生芽增殖並獲得優質種苗，其特征在於該方法包括以下步驟：

1).材料：秋石斛蘭優良種質；

 

2).外植體的消毒：取秋石斛蘭當年生具5-6個節的嫩芽，去除葉片後，用水衝洗幹淨後剪成兩段，在超淨工作台上用70％的酒精浸泡1分鍾，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鍾，無菌水衝洗5次後，用無菌吸水紙吸幹，剪取2-3厘米帶節的莖段和莖尖，接種到原球莖和叢生芽誘導培養基上；

 

3).原球莖和叢生芽的誘導：誘導培養基為MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸 0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養基上，在培養溫度26±2℃條件下，10天莖尖開始生長，20天左右莖段節上有新芽形成並生長，當6-苄基嘌呤為4-5時新芽基部有原球莖產生，培養基含蔗糖30克/升，pH5.5-5.8，瓊脂0.7％；

 

4).叢生芽增殖：將利用莖段和莖尖培養得到的叢生芽，剪去部分葉片轉移到叢生芽增殖培養基：MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，能誘導原球莖和叢生芽形成，原球莖能在較高的6-苄基嘌呤濃度培養基上增殖，原球莖轉入較低6- 苄基嘌呤濃度的培養基時會分化出叢生芽，叢生芽在較低6-苄基嘌呤濃度的培養基上能增殖；

 

5).生根壯苗培養：叢生芽增殖多代後，可將叢生芽切割成單個芽，接種在1/2MS 培養基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養基上進行生根壯苗培養，40天能形成株高3-4厘米的完整植株；

 

6).試管苗移栽：試管苗移栽時，在自然光照下煉苗5-10天，將秋石斛蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗淨根部的培養基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鍾後涼幹，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過的泥炭蘚為栽培基質，保持適當通風和足夠的濕度，冬季時采用溫室種植，溫度維持在15℃以上。