（一）溫度： 對大多數植物組織20～28℃即可滿足生長所需，其中26～27℃最適合。
（二）光： 組織培養通常在散射光線下進行。光的影響可導致不同的結果。有些植物組織在暗處生長較好，而另一些植物組織在光亮處生長較好，但由愈傷組織分化成器官時，則每日必須要有一定時間的光照才能形成芽和根。有些次生物質的形成，光是決定三因素。
（三）滲透壓： 滲透壓對植物組織的生長和分化很有關係。在培養基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質可以調整滲透壓。通常1～2個大氣壓可促進植物組織生長，2個大氣壓以上時，出現生長障礙，6個大氣壓時植物組織即無法生存。
（四）酸堿度： 一般植物組織生長的最適宜pH為5～6．5。在培養過程中pH可發生變化，加進磷酸氫鹽或二氫鹽，可起穩定作用。
（五）通氣： 懸浮培養中細胞的旺盛生長必須有良好的通氣條件。小量懸浮培養時巨常轉動或振蕩，可起通氣和攪拌作用。大量培養中可采用專門的通氣和攪拌裝置。
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