微生物限度檢查驗證試驗

試驗目的：進行微生物驗證試驗

背景知識（選填項目）：

原理（選填項目）：

實驗儀器：高壓蒸汽滅菌器、電子天平 、黴菌培養箱、電熱恒溫培養箱。

主體內容（操作步驟，必填項目）：

1、菌液製備：參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的菌液的製備方法，采用10倍稀釋法製備菌液。

（1）． 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草杆菌的肉湯培養物致至營養肉湯培養基中，置30～35℃培養18~24h，分別取上述培養物1ml加9ml0.9%的無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋為10-4，細菌數約為50~100cfu/ml的菌懸液，做活菌計數備用。

（2）． 接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，經25 ℃培養24~48小時，取上述白色念珠菌黴菌液體培養物1ml加9ml0.9%的無菌氯化鈉溶液，10倍稀釋至10-5，細菌數約為50~100cfu/ml的菌懸液，做活菌計數備用。

（3）． 接種黑曲黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜麵培養基中，取經25 ℃培養5～7天，加3~5ml0.9%的無菌氯化鈉溶液洗下黴菌孢子，吸取出菌液， 用標準比濁管進行比濁後作為原液，然後取1ml加9ml0.9%的無菌氯化鈉溶液，逐管10倍稀釋為10-4，細菌數約為50~100cfu/ml的孢子懸液，做活菌計數備用。

（沒有特殊要求的微生物限度檢查，隻需要培養枯草芽孢杆菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲黴菌5個菌種。如需檢沙門菌，則需要再培養乙型副傷寒沙門菌，如局部用栓劑等，菌種代數在5代以內。）

2、供試菌液的製備：參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的供試品液的製備方法，製備本品的供試品液。

平皿法：(常規法)

(1) 試驗組：①取10個平皿，2個一組分成5組，分別做好大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲黴的標記。

② 取1：10供試品溶液1ml，分別加入10個平皿中，再依次加入上述5種菌的菌懸液1ml(50～100cfu)，每株菌平行製備2個皿，立刻傾注營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基，分別置30～35℃培養48 小時和23～28℃培養72小時。

(2)菌液組：分別取上述稀釋的菌液1ml注入平皿內，每個菌平行製備2個平皿，測定所加的試驗菌數。

(3)供試品對照組：取1：10供試液1ml分別注入4個平皿中，立刻注入營養瓊脂和玫瑰紅鈉瓊脂培養基，每種培養基製備2個平皿，分別置30～35℃培養48 小時和23～28℃培養72小時，以測定供試品的本底菌數。

3、細菌、黴菌、酵母菌的方法學驗證試驗結果記錄：

4、控製菌驗證

（1）菌液製備：參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的菌液的製備方法，用10倍稀釋法製備菌液。

（2）供試菌液的製備：參考中國藥典2005年版一部附錄微生物限度檢查法的供試品液的製備方法，製備本品的供試品液。

（3）控製菌方法學考察結果表

 

結論：本品按中國藥典2005年版一部微生物限度檢查，經方法學驗證試驗，結果可用－－－ 法進行控製菌檢驗。