工業微生物的篩選和紫外誘變育種

錄入時間:2011-8-1 14:24:16 來源：互聯網

一．實驗目的：加深對發酵工程上遊技術中菌種選育的認識；學會常規選種和育種的方法，樹立科學認真仔細的態度，培養科研協作精神。

二、實驗原理：根據一定的生產目的如抗生素或酶類的生產，建立不同的篩選模型，並從特定的樣品如土壤中篩選出高產適宜的菌株。

三．培養基及儀器：

降解亞硝酸鹽培養基：NaNO2 0.2%，KH2PO4 0.7%，MnSO4.H2O 0.25%，Na2HPO4 1.35%，MgSO4.7H2O 0.1%，葡萄糖1％，瓊脂2％，0.1MPa滅菌20分鍾。6個250ml三角瓶，各裝100ml培養基。

同時滅菌試管20支，1ml吸管12支，普通平皿60個，滅菌生理鹽水。培養亞硝酸鹽降解菌發酵液1瓶，每位同學準備1個斜麵。

3．潔淨工作台、培養箱、三角瓶、曲玻棒、平皿。

四．操作方法

課前半小時打開超淨工作台滅菌。

1.土壤中降解亞硝酸鹽細菌的篩選分離

稀釋土樣。5g土樣，加入45ml無菌水中。為10-1，然後取1ml加入9ml無菌水，為稀釋10-2，直至稀釋至10-8溶化培養基。

將溶化後不燙手的培養基倒入平皿，剛好蓋過平皿底部，迅速搖勻後放置，使培養基冷卻，要求平皿培養基表麵平整、光滑。吸取10-4，10-5或10-6相應濃度的土樣稀釋液0.5ml，加入平皿內，用燒過滅菌的曲玻棒均勻塗平，放入37℃培養箱中倒置培養48小時。

2.亞硝酸鹽分解菌的紫外誘變育種

取10ml培養好的液體培養液，放入90 mm培養皿，將皿放置於誘變箱的磁力攪拌器上,置於30 W 紫外燈下，照射90 s，用無菌生理鹽水稀釋至10-6，10-7，10-8，按常規方法塗布篩選平板。

同學可自行選擇培養亞硝酸鹽降解菌和誘變菌。每位同學做一個平皿。並標記好稀釋度、種類和名字。

五、實驗進程安排及結果分析

（1）第1次實驗：稀釋土樣，倒平板，冷卻後進行平板塗布，放入恒溫培養箱中；或進行菌種誘變，稀釋誘變菌，倒平板，冷卻後進行平板塗布，放入恒溫培養箱中。然後緊接著進行第二個實驗。

（2）第二次實驗：同學回到實驗室中，記錄實驗結果。培養24-48h後，記錄觀察到的菌落數量。並對其中2-5個不同菌落進行形態描述。挑取其中1個菌落，接入斜麵培養基進行菌種保藏。