細胞學技術的一般環節
錄入時間:2011-8-11 15:09:36
來源：生物在線
一、紡錘體阻斷劑（Spindle inhibitor）
在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態。紡錘體的形成在於細胞質和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因
此，改變細胞質的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區更為清楚。
在培養中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋
水仙素的濃度範圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養前處理2—4小時。但在實際工作中需要借助濃度和處理時間來控製染色
體的收縮程度。秋水仙素作用時間越長，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實驗室經驗而定。
二、低滲液（hypotonic solution）
低滲液是指滲透壓和離子強度均低於正常細胞生理條件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、氯化鉀（0.075M）
等。低滲效果取決於低滲液的化學組成、低滲的溫度和處理時間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展，同時可使粘附於染色體的核
仁物質散開，以便能在一個平麵上觀察所有染色體形態。
實驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決於實際操作，鑒於實驗的連續性和穩定性，本實驗室采用0.35%KCl），其優點有：①染
色體輪廓清楚，可染色性強，染色時間短，②用於顯帶染色時能充分顯示帶型特點。
低滲處理為37℃，15－25分鍾，以預實驗條件為準。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定並維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染色效果。
單純的固定液一般難以達到這些要求，因此在實驗中使用兩種混和的固定液。由於Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是
效果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時配製，長時間放置影響固定效果，固定時間15分鍾至24小時，冰箱、室
溫均可。必要時可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利於細胞膨脹、染色體鋪展，但易導致細胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴片使細胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細胞膜破裂，染色體分散開。載玻片可用冰片和幹片，效果均好。滴片後需空氣幹燥。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配製後原液儲存。在常規染色中，並不比其他染料優越，但在顯帶技術
中，卻是無可比擬的。
Giemsa工作液在使用前臨時配製，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩衝液10－40份）。染色後，染色質呈紅色，細胞核是藍色。
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