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實驗室常識



錄入時間:2011-8-16 15:30:05 來源:互聯網

   1.在重蒸酚中為什麽加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?
     保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,並在一定程度上能抑製DNase的活性。
   2.如何將不同構型的質粒DNA區別開?
   由於不同構型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同,ccc DNA的泳動速度最快,通過凝膠電泳方法可將不同構型的DNA區別開。
   3.用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時,通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇,為什麽?
   異戊醇可以降低表麵張力,從而減少氣泡產生。另外,異戊醇有助於分相,使離心後的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
   4.用乙醇沉澱DNA時,為什麽加入單價的陽離子?
   用乙醇沉澱DNA時,通常要在溶液中加入單價的陽離子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的負電荷,減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,而易於聚集沉澱。
   5.在提取RNA時經常使用異硫氰酸胍,有什麽作用?
    RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結構迅速被破壞,使RNA從細胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細胞內的RNA酶失活,使釋放出的RNA不被降解。
   6.蛋白印跡中封閉液的作用?
     封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
   7.DNA通常保存在什麽緩衝液中?
   采用TE緩衝液,Tris-HCl的緩衝係統,加入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑製依賴於二價金屬離子的DNA酶的活性,對DNA起到保護作用。
   8.在酶切反應緩衝液中為什麽加入BSA?
   通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。
   9.簡單的克隆載體必需包括什麽?
    複製起點;選擇標記:主要是抗性基因;多克隆位點:便於外源DNA的插入。
   10.用酚抽提細胞DNA時,有什麽作用?
    使蛋白質變性。
   11.在分離DNA時,要使用EDTA,為什麽?
   EDTA是金屬離子螯合劑,螯合二價離子,抑製核酸酶的活性。
   12.在分離DNA過程中,造成DNA分子斷裂的因素有哪些?
    核酸酶降解;化學降解;物理剪切。
   13.使用離心機應注意什麽?
    首先應該根據自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管,使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的最大允許轉速。離心前注意嚴格平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規範、準確。離心時要留人看守,發現離心機異常應立即關閉離心機。離心結束後要安放好轉子。
   14.分子生物學實驗室常用的滅菌方法有哪些?
    高壓蒸汽滅菌、幹熱滅菌、化學藥劑消毒、過濾除菌
   15.使用移液器有哪些注意事項?
   垂直吸液、慢吸慢放;選擇合適的量程範圍,不能超過量程使用;選擇與移液器匹配的槍頭,安裝槍頭時不要用力太猛;移液器每日用完後,應旋到最大刻度。

 

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