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病毒的細胞培養



錄入時間:2011-8-22 9:45:54 來源:動物微生物學

 

病毒的嚴格細胞內寄生性決定培養病毒必須使用活細胞,實驗動物、雞胚和細胞培養可提供病毒增殖所需的大量活細胞,尤其是細胞培養。

(一)、細胞培養的特點

在體外將組織細胞分散成單個細胞再培養長成的細胞為細胞培養,得以用於病毒學研究、診斷及疫苗製備等方麵。由於細胞培養(cell culture)源自組織培養(tissue culture),現組織培養和細胞培養基本看作是同義詞,前者是包括後者在內的更廣義的動物細胞、組織、器官的離體培養。利用細胞培養來增殖病毒具有以下特點:

1. 細胞培養中的每個細胞具有基本一致的生理特性,對病毒的易感性相同,沒有實驗動物的個體差異。

2. 可用於試驗的數量遠遠超過動物或雞胚,並且易於人工控製,可在無菌條件下進行標準化的試驗,重複性好。

3. 病毒增殖可通過觀察細胞產生的變化如細胞病變等來判定結果,也可結合免疫學技術檢測細胞內有無增殖的病毒。

4. 用細胞培養可從感染動物組織內分離病毒並進行病毒克隆,以分離獲得純化的單一毒株。

(二)、細胞培養的類型

1. 原代細胞(primary cell):動物組織經胰蛋白酶等消化、分散,獲得單個細胞,再於培養器皿中生長的細胞。最好用SPF動物組織,以避免攜帶潛伏的病毒。

2. 二倍體細胞株(diploid cell strain):將長成的原代細胞消化分散成單個細胞,繼續培養傳代,而獲得其染色體數目與原代細胞一樣的細胞株,即為二倍體細胞株。這種細胞株不能無限傳代,並且有些細胞難於獲得二倍體細胞株。

3. 傳代細胞係(established cell line):由腫瘤組織或轉化細胞培育而成的染色體數目異常、可無限傳代和性狀穩定的細胞株。傳代細胞係具有傳代及培育簡便、應用廣泛等優點,但也具有對分離野毒不敏感、易於汙染黴形體或隱性感染病毒以及致腫瘤的潛在危險等缺點,因此傳代細胞係一般不能用於製備疫苗,尤其是人用疫苗。

(三)、細胞培養的方法

1. 靜置培養(stationary culture):將消化分散的細胞懸液分裝於培養瓶或培養板,封閉,靜置於恒溫箱內培養數天,可生成貼壁的單層細胞。

2. 旋轉培養(roller culture):除細胞培養瓶不斷緩慢旋轉(510 r/min)外,基本方法同靜置培養,經恒溫培養數天後,可在細胞培養瓶的四壁長滿單層細胞。此法的細胞產量高,適用於疫苗生產。

3. 懸浮培養(suspensive culture):通過攪拌使細胞處於懸浮狀態,並補充營養和校正pH,使生長細胞不貼壁而處於懸浮狀態。

4. 微載體培養(micro-carrier culture):在懸浮培養的基礎上,讓細胞在對細胞無毒性、直徑35100 mm微小顆粒上長成單層細胞。此法由於細胞數大為增加,對規模化的細胞或疫苗生產很有吸引力。

 

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