2 玫瑰組織培養的方法
2.1 外植體選取 從生長在田間或盆栽的優良品種植株上，選取生長健壯、無病蟲害的當年生枝條的莖尖和幼莖。取材最好在晴天正午，並且取用植株上部的幼莖。陰雨天或靠近地麵的幼莖，表麵汙染較為嚴重，難於消毒。玫瑰除用莖尖和幼莖做外植體外，也可以用葉片、葉柄、根、莖、原生質體、胚、花藥、子房、花萼和花托做外植體［7］。
2.2 消毒滅菌及無菌苗的建立 取玫瑰外植體，用5%～10%的次氯酸鈉浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用無菌水清洗7～10次後接種。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒滅菌完畢後，將幼莖切割成05～10cm長的至少帶有一個節的切段，接種於培養基中［6］。
2.3 愈傷組織的誘導 Hill(1967)最早報道從雜交茶香月季（hybridtea rose）的莖上誘導了愈傷組織，該實驗證明在培養基中添加2，4-D或添加NAA和激動素KT均能很快誘導出愈傷組織。隨後不同實驗以不同品種為試驗材料，從葉、葉柄、根、莖、原生質體、合子胚、花藥、子房、花瓣、花萼、和花托成功地誘導了愈傷組織。［7］
2.3.1 愈傷組織的成功誘導與品種的基因型有關?搖Lloyd等（1988）曾研究Rose prsica與xanthina，hybrida，Clarissa，Rcabrosa的愈傷發生能力，發現隻有Rose persica與xanthina在MS基本培養基上，添加低濃度的BAP和NAA時，節間能產生愈傷，愈傷組織脆弱，呈淡黃綠色。Kunitake等(1993)研究了Rose rugosa Thunb，Rose multiflora，Rose allbacv，SemiplenaRose hybridacv，DuplesRose harisonii，Roses pinosissi的未成熟種子的愈傷發生能力，發現隻有Rose rugosa Thurb能產生愈傷組織，品種Rontl和Soraya比品種Baccara和Mercedes更易產生愈傷(Kintzios等，1999)。［7］
2.3.2 外植體類型?搖Aren等（1993）詳細地調查了Rose hybrida cvMeirutral不同外植體的愈傷誘導率，發現不同外植體愈傷產生的能力不同，葉為90%，根為70%，節間為55%，花藥為19%。
2.3.3 激素 激素也是影響愈傷生成的重要因素，Rout等（1991）以Landora為材料，在添加BA和NAA，2，4-D的MS的培養基上，外植體在接種的7～12d後，在近軸麵的葉柄和中脈處產生愈傷，愈傷組織誘導頻率高達92%。在接種後15～20d，外植體莖切端處產生愈傷，誘導率為76%。生長素種類和濃度對愈傷產生能力的影響同樣很大。早期實驗多采用NAA結合BAP或BA等，近年來多采用2，4—D，並證明2，4—D是誘導愈傷的必要因素（Kintzios等，1999；Rout等，1996；van der Salm等，1996；Vises—suwan等，1997）。進一步研究發現2，4-D對愈傷的誘導效果依賴於月季的基因型，如2，4—D濃度從113umol/L增加到181umol/L降低了Rose hybrida栽培種“Care-freeBeauty”的愈傷誘導頻率，但該濃度則對另一個品種“Grand Gala”無影響。對於“Red Sunblaze”而言，當濃度從113umol/L增加到452umol/L，則表現出愈傷的誘導率提高了，隨後當2，4—D再增加，則顯著地降低愈傷的誘導頻率。愈傷組織在誘導愈傷組織的培養基上能得到很好繼代培養（subculture、Li等，2002）。Van der Salm等（1996）證明2，4—D對誘導Rose persica與xanthina和Moneyway產生愈傷是非常必要的，進一步添加低濃度的BA有正效應，但如BA濃度過高，則產生抑製作用。與以上實驗結果不同，Kintzios等（1999）則發現2，4—D對愈傷誘導有負影響作用，可能因為采用的外植體是成熟的葉片。
2.3.4 合子胚的發育時期對愈傷的形成能力也有影響?搖如處於心形胚的合子胚，其愈傷誘導率隻有2%，子葉胚時的合子胚愈傷誘導率達到85%。［7］
2.4 不定芽的誘導 月季的常規繁殖方式主要靠扡插、嫁接和壓條等，繁殖係數低，遠遠滿足不了生產的需要。80年代初，采取組織培養方法快速繁殖月季苗，用側芽、頂芽、並誘導生根。第一報道月季不定芽形成見Elliott(1970)，他在聚花月季（Rose multiflora）上成功地誘導了不定芽的形成，並誘導幼苗生根。Zieslin和Halevy(1976)報道細胞分裂素有利於提高不定芽的數量，但也誘導花器官敗育或退化的頻率。不定芽的誘導與供試材料的基因型有關，同時還與外植體的取材部位有關，來源於枝條中部的側芽的繁殖速率最快（Bressan等，1982）。培養基中添加蔗糖有增加叢芽數量的作用（Langford和wainwright，1987）；加入低濃度的GA能進一步改善芽繁殖，95%的外植體能產生7個以上的不定芽（Rout等1990）。能提高芽繁殖數量的物質還有月桂酸甲酯（Voyiatzi等，1995）、乙烯（Kevers等，1992）等。誘導不定芽的培養基為MS培養基添加低濃度的激素BAP03～05mg/L，NAA0004～03mg/L或IAA或GA00～20mg/L。［7］Martin等（1981）調查了2125個玫瑰側芽做外植體獲得的無菌苗三年間在大田生長的情況，沒有發現變異植株，這說明側芽方式繁殖的玫瑰植株性狀很穩定。
2.5 增殖培養 玫瑰的增殖培養，一靠無菌苗切段繁殖，二靠誘導不定芽，形成從生苗；三靠愈傷組織形成體細胞胚或原球胚。將已長大的月季嫩莖切成帶1～2個節的莖段，投入新鮮的增殖培養基上，5～6周進行一次繼代增殖，增殖係數平均達4～6。在外植到培養10～15d內第一葉的葉原基伸長，第二葉片葉原基可見；15～20d側芽伸長；25～30d長度達6～10mm，繼代增殖會按幾何級數增長起來。［5］增殖培養基可用不定芽誘導培養基，如MS+BA03～05+NAA0004～03mg/L。
2.6 壯苗與生根 壯苗培養的培養基為：MS+BA03～05+NAA001～01或MS+BA03～05+IBA03。 ［4］也可以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合二為一。玫瑰組培苗增殖與壯苗需光照10～12h，光照強度2000lx，溫度24～26℃。［4］
玫瑰在組培過程中，其生根能力因品種特性、所用植物材料及培養基成分而有較大差異，許多研究結果表明，玫瑰莖段微繁殖容易生根，使用植物激素IAA，IBA或NAA含量01～05mg/L，蔗糖含量2%～25%的MS培養基有利於玫瑰莖段生根。另外，光照、溫度等對玫瑰微繁殖生根也有直接影響，Bressan等（1982）研究指出，光照時間每天12h以上，光照強度適宜則有利於生根。一般情況下，玫瑰莖段組織培養8～10d內則可生根。［6］加入適量的活性炭有利於玫瑰生根。
2.7 煉苗與大田移栽 煉苗和大田移植是玫瑰微 繁殖獲得成功的最後階段。［6］組培幼苗由人為培養環境轉移到天然生長環境中，環境條件發生巨大變化，濕度大幅度降低，溫度不恒定，光照強烈，微生物多，故需煉苗過渡。一般玫瑰微繁殖煉苗需經過室內三天的取蓋煉苗，然後將苗從瓶中取出，洗去根部培養基，定植在珍珠岩、泥炭、蛭石或沙土中，用3～5%的多菌靈噴洗。煉苗時要注意基質中的水分含量，水分太少，不能滿足苗生長發育；水分太多，導致爛苗。煉苗中、後期要注意通氣，給予足夠的光照，其幼苗成活率可達80％以上。［6］
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