7、植物材料表麵用消毒劑滅菌
從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些汙染源一旦帶入培養基，便會造成培養基汙染。因此，植物材料必須經嚴格的表麵滅菌處理，再經無菌操作手續接種到培養基上，這一過程叫做接種。接種的植物材料叫做外植體（explant)。
首先，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗幹淨，如用適當的刷子等刷洗。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水衝洗幾分鍾至數小時，衝洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內衝洗。流水衝洗在汙染嚴重時特別有用。
洗時可加入洗衣粉清洗，然後再用自來水衝洗洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表麵的汙物，除去脂質性的物質，便於滅菌液的直接接觸。當然，最理想的清洗物質是表麵活性物質吐溫。
第二步是對材料的表麵浸潤滅菌。要在超淨台或接種箱內完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10-30秒。由於酒精具有使植物材料表麵被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內部的材料，則可隻用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發後再剝除外層，取用內部材料。
第三步是用滅菌劑處理。表麵滅菌劑的種類較多，可根據情況選取1-2種使用見下表。
常用滅菌劑使用濃度及效果比較表
滅菌劑名稱 使用濃度% 消毒難易 滅菌時間 滅菌效果
酒精 70-75 易 0.1-3 好
氯化汞 0.1-0.2 較難 2-10 最好
漂白粉 飽和溶液 易 5-30 很好
次氯酸鈣 9-10 易 5-30 很好
次氯酸鈉 2（活性氧） 易 5-30 很好
過氧化氫 10-12 最易 5-15 好
抗菌素 4-50mg/L 中 30-60 較好
上述滅菌劑應在使用前臨時配製，氯化汞可短期內儲用。次氯酸鈉和次氯酸鈣都是利用分解產生氯氣來殺菌的，故滅菌時用廣口瓶加蓋較好；升汞是由重金屬汞離子來達到滅菌的；過氧化氫是分解中釋放原子態氧來殺菌的，這種藥劑殘留的影響較小，滅菌後用無菌水漂洗3-4次即可；由於升汞液滅菌的材料，難以對升汞殘毒去除，所以應當用無菌水漂洗8-10次，每次不少於3分鍾，以盡量去除殘毒。
滅菌時，不瀝幹的植物材料轉放到燒杯或其他器皿中，記好時間，倒入消毒溶液，不時用玻璃棒輕輕攪動，以促進材料各部分與消毒溶液充分接觸，驅除氣泡，使消毒徹底。在快到時間之前1-2分鍾，開始把消毒液傾入一備好的大燒杯內，要注意勿使材料倒出，氫淨後立即倒入無菌水，輕攪漂洗。滅菌時間是從倒入消毒液開始，至倒入無菌水時為止。記錄時間還便於比較消毒效果，以便改正。滅菌液要充分浸沒材料。寧可多用些滅菌液，切勿勉強在一個體積偏小的容器中使用很多材料滅菌。
在滅菌溶液中加吐溫-80或Triton X效果較好，這些表麵活性劑主要作用是使藥劑更易於展布，更容易浸入到滅菌的材料表麵。但吐溫加入後對材料的傷害也在增加，應注意吐溫的用量和滅菌時間，一般加入滅菌液的0.5%，即在100ml加入15滴。
最後一步是用無菌水漂洗，漂洗要求3分鍾左右，視采用的消毒液種類，漂洗3-10次左右。無菌水漂洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用。
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