★植物組織培養應用步驟:1、獲得無菌外植體,建立起無菌培養體係。2、進行增殖,不斷產生不定芽或胚狀體。3、生根培養。4、試管苗移栽。
★外植體選擇的原則:1、必須含有活細胞。2、幼嫩組織所含活躍分裂的細胞比例高。3、母珠必須健康並且無任何腐爛或生病的跡象。4、母珠必須活躍生長並且不會立即進入休眠。
★外植體的確定選擇:1、莖尖(園藝植物組織培養中應用最多,繁殖率高,不易發生遺傳變異,但取材有限);2、莖段(采用嫩莖的切段促進腋芽萌發,取材容易);3、葉(幼嫩葉片組織通過愈傷組織或不定芽分化產生植株,取材容易,操作方便,但易發生變異);4、花球和花蕾;5、種子、根、塊根、塊莖、花瓣等。
★消毒的原則:消毒劑與外植體應接觸足夠長的時間以除去外植體表麵的微生物,但應盡量減少對外植體細胞的破壞。
★消毒方法:衝洗植物材料除去泥土等大的顆粒→浸入70-75%乙醇,有利於植物表麵的浸濕→用5-20%NaClO溶液(加1滴表麵活性劑)表麵消毒5-10min→用無菌水衝洗至少3遍→與消毒劑接觸過的切麵在轉移到無菌培養基前應切去,因為消毒劑會殺死外露的細胞從而影響營養吸收→切取外植體,通常為10mm的莖段和直徑10mm的葉片部分(太大激素作用減弱,太小則不易成活)。
★消毒注意事項:1、表麵消毒劑對植物組織是有害的,應正確選擇消毒劑的濃度和處理時間,以減少組織的死亡。2、在表麵消毒後,必須用無菌水漂洗材料3次以上以除去殘留殺菌劑,但若用酒精消毒,則不必漂洗。3、與消毒劑接觸過的切麵在轉移到無菌基質前需將其切除,因為消毒劑會阻礙植物細胞對基質中營養物質的吸收。4、若外植體汙染嚴重則應先用流水漂洗1小時以上或先種子培養得到無菌種苗,然後用其各個部分建立組織培養。5、HgCl2效果最好,但對人的危害最大,用後要用水衝洗至少5次。
★莖尖培養:切取莖的先端部分或莖的分生組織部分進行無菌培養。
步驟:無菌培養的建立→芽的誘導→生根培養→試管苗的移栽(遺傳變異)
注意點:試管苗移栽過程中,由異養→自養,恒溫→溫差,無菌→有菌,光弱→光強,濕度高→濕度低,應該保持苗的水分平衡(加塑料薄膜和使用噴霧機),選擇適當的基質,注意光、溫的條件。
★安祖花:葉片→誘導愈傷組織→誘導芽→誘導根 生根
↓ ↑
增殖→切根→芽的增殖→再培養→壯苗→生根之前
不定胚的誘導:組織片→含有2,4-D的培養基上→產生不定胚→去除2,4-D的培養基上→球型胚→心型胚→魚雷型胚→植物體。
不定芽的誘導:用BA誘導,在球、心、魚雷時要去除BA。
★胚胎培養的意義:1、對於胚乳發育不良或胚與胚乳間不親和的材料進行離體胚培養,有助於遠緣雜交獲得成功。2、為研究胚在各個發育時期的營養需要提供了一個很好的機會。3、能對整個胚及其各部分的再生潛力進行研究。
★胚培養中的兩個重要問題:1、胚剝離的方法:剝離的最佳時間是授粉後13-15天。2、培養基的成分:找到合適的培養基,在胚培養中加入蔗糖(能源、保持適當滲透壓)。
上一篇:植物組織培養知識概要(二)
下一篇:植物組織培養知識概要(四)