獸醫診斷細菌學檢查

當懷疑發生細菌性傳染病時，最可靠的診斷依據就是檢查病原性細菌，並對其進行分離、培養及鑒定。 

　　1.病料的采取作細菌學檢查用的病料應選取發病後未經藥物治療的、自然死亡不久或瀕死期動物的新鮮病料。一般取肝、脾、淋巴結和血液，也可根據具體情況選取特殊病料，如梭菌性腸炎可取小腸內容物，鏈球菌性關節炎和膿腫可取關節液和膿汁，布氏杆菌病可取流產胎兒或胎衣、胎液，傳染性鼻炎、雞傳染性鼻炎和慢性呼吸道病可取眼、鼻及眶下竇分泌物等。采取的病料若不能馬上作檢查或須往外地送檢，則應放在含30%甘油的滅菌生理鹽水中於4℃左右保存，並不超過72小時。病料采取過程中應嚴格無菌操作，避免汙染雜菌，同時也防止汙染環境或自身感染。 

　　2.塗片鏡檢病料若為實質髒器如肝、脾及淋巴結等，則剪下一塊，用其新鮮切麵塗在載玻片上;若為液體病料如血液、腹水等，則取一滴直接加在載玻片上均勻塗開;若為較黏稠的膿汁、糞便等，則先在載玻片上加一滴蒸餾水，再取少量病料放於其上混勻並塗開。塗好的病料片子自然幹燥後在酒精燈上火焰固定，然後染色。細菌載玻片染色的方法很多，常用的有美藍染色法、革蘭染色法、瑞特染色法、姬姆薩染色法等。目前這些染色液均已商品化，在各大醫療器械試劑商店均可買到，並附有使用說明，按其說明操作即可。染色結束後讓載玻片自然幹燥，再於光學顯微鏡下用油鏡頭進行觀察，根據觀察到的細菌形態特征可作出初步判斷。 

　　必要時進一步作分離培養。 

　　3.分離培養細菌的分離培養可分為有氧培養和厭氧培養，前者即在有空氣的自然條件下進行，後者則需在人工造成的特殊厭氧條件下進行。最好的厭氧條件是二氧化碳培養箱，但價格昂貴，因此一般常用簡便的厭氧培養方法，如燭光法(將培養物放入一個能密封的容器中，在容器中點上蠟燭，密封容器，待氧氣耗盡蠟燭自然熄滅即可)和液體石蠟法(在液體培養液上加一層液體石蠟，使培養基與空氣隔絕)等。按培養基的性質可分為固體培養和液體培養，前者是將各種營養成分與瓊脂共同融熔後傾注平皿，待其冷凝後用作細菌培養;後者則是以牛肉湯為基礎，加入所需要的其他營養成分即可。分離培養不同的細菌需用不同的培養基和方法，但一般來講常見病原菌都能在普通瓊脂平板、鮮血瓊脂平板和　　普通肉湯培養基上生長。另外，還有用於鑒別不同細菌的鑒別培養基如麥康凱瓊脂、伊紅一美藍瓊脂及其他特殊培養基。目前幾乎所有培養基都已有商品化成品在各地醫用試劑商店出售，不需像以前那樣自己配製，需用時買回來按說明書簡單處理後即可使用，非常方便。 

製備培養基所用的玻璃平皿、試管、吸管等物品應用紙包紮密封後在幹燥箱中160℃幹烤滅菌2小時;培養基則應在高壓蒸汽滅菌器中121℃滅菌30分，特殊培養基則按其具體要求進行高壓蒸汽滅菌。液體培養基一般是先分裝入試管，密封後再高壓滅菌，冷卻後可直接使用。固體培養基一般是先高壓滅菌，待冷卻至50℃左右時快速傾注平皿成為瓊脂平板，或分裝入幹烤滅菌的試管中製成瓊脂斜麵。整個操作過程均應在超淨工作台或無菌罩中進行。製備好的培養基密封後於4～10℃可保存1～2周。 

　　分離、培養細菌也應在超淨工作台或無菌罩內進行。用一手套刀片或鋼鋸條在酒精燈上加熱後於病料表麵燒烙一T，然後用剪刀在燒烙麵上開一小口，用火焰消毒過的鉑金耳(也叫接種環)插令切口深部，勾取少量病料組織在瓊脂平皿中劃線接種，或接種肉湯培養基。若為液體或半固體病料，則直接勾取病料接種培養基上即可。然後根據需要以需氧或厭氧條件在37℃培養18～24小時。觀察有無可疑菌生長，並記錄細菌的生長特征。勾取少量細菌塗片、染色、鏡檢，觀察所分離細菌的形態特征以協助分析。若對所分離細菌不易作出鑒定，則需進一步作生化鑒定、血清試驗及動物試驗等。一般當用顯微鏡不易直接從病料中檢出細菌時，分離培養卻能檢出，因此分離培養對細菌的檢出率高於鏡檢。 

　　4.生化試驗許多細菌在培養特性、形態特征上非常相似，有時很難區分它們，這就需要依靠生化試驗來作出鑒定，因為不同的細菌對營養成分的利用及其形成的代謝產物有顯著差異。最常用的生化試驗有糖發酵試驗、靛基質試驗、硫化氫試驗、明膠液化試驗、硝酸鹽還原試驗等。另外，各種鑒別培養基本質上也都屬於生化試驗，反過來，各種生化試驗培養基也都是鑒別培養基。生化試驗一般需觀察24～72小時，而且目前多為微量試驗，均有成套反應管出售，從各大醫用試劑商店買回即可使用，簡便可靠。作生化鑒定用的細菌必須經過純化即純培養，否則結果不可靠。生化反應管買回後將純化的細菌直接接種進去，37℃條件下培養、觀察並記錄結果，最後根據結果作出判定。 

　　5.藥敏試驗在傳染病的診治過程中，有時雖然已分離、培養出細菌，並確診出是什麽病，但使用藥物後治療效果並不理想。這是因為目前抗菌藥物的種類很多，而不同細菌或菌株對各種藥物的敏感性差異很大。同時由於長期以來抗菌藥物的廣泛使用以及一些不合理的用藥導致了大量耐藥性菌株的產生，這就　　使得人們不得不進行藥敏試驗。藥敏試驗的原理和方法都很簡單，即當細菌接種到培養基上進行培養時，分別加入一定濃度的不同抗菌藥物，然後觀察培養結果。哪種抗菌藥物能抑製細菌的生長，它就是敏感藥物，或者說該細菌對這種藥物敏感;反之則說該細菌對這種藥物有抗性，也叫耐藥性。最常用的藥敏試驗是紙片　　法。將欲測試的抗菌藥物按規定濃度稀釋後浸泡直徑4毫米的圓形濾紙片，無菌晾於或烘幹後即可使用。目前醫藥試劑商店已有各種商品化藥敏紙片出售，買來即可使用，非常方便。實驗時先將細菌純化培養，然後挑取少量純培養物劃線接種普通瓊脂平板。 

　　將不同的藥敏紙片分散均勻放在接種過細菌的瓊脂平板中，加蓋後37℃培養18～24小時觀察結果。細菌對哪種藥物敏感，哪種藥敏紙片周圍就無細菌生長，形成一個空白區，此區稱為抑菌圈。 

　　細菌對藥物的敏感性是以抑菌圈直徑的大小來判定的，每種藥物都有其判定標準。

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