（2）取潔淨的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
（3）將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表麵張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，注意不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。
（4）靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下觀察到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應適當關小孔徑光闌並減弱光照的強度。
（5）計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區。除數上述四個大方格外，還需數中央1個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
（6）對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重複計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
（7）測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板衝洗幹淨，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗淨後自行晾幹或用吹風機吹幹，放入盒內保存。
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