【摘要】 目的建立白斑酊等3種製劑的微生物限度檢查方法。方法采用5種陽性菌回收率實驗測定其是否含抑菌成分。結果根據回收率試驗結果，白斑酊、首烏合劑2種供試品試驗菌的回收率試驗均高於70%，提示無抑菌現象；皮炎洗劑有抑菌作用，但可通過稀釋法消除抑菌作用。結論白斑酊、首烏合劑可按常規方法進行微生物限度檢查；而皮炎洗劑應用培養基稀釋法進行微生物限度檢查。
【關鍵詞】 白斑酊； 首烏合劑；皮炎洗劑； 微生物限度檢查
Abstract：ObjectiveTo establish the microbial limit tests of three preparations such as Baiban tincture. MethodsThe determination of the recovery of five positive microorganisms was used to assay whether there are antibacterial components in three preparations. ResultsThe results, which the recoveries of the tested microorganisms were more than 70%, showed no antibacterial activity in Baiban tincture and Shouwu mixture，meanwhile Dermatitis lotion had antibacterial activity which could be eliminated by media dilution method. ConclusionThe conventional method of the microbial limit tests may be used for Baiban tincture and Shouwu mixture, while media dilution method is used for Dermatitis lotion.
Key words：Baiban tincture； Shouwu misture; Dermatitis lotion； Microbial limit test
按2005版《中國藥典》要求［1］，對製劑所采用的微生物限度檢測方法需進行驗證實驗，以保證測定方法的可靠性。根據《中國藥典》要求，筆者對白斑酊、首烏合劑、皮炎洗劑的微生物限度檢查法進行方法驗證，為規範醫院製劑的微生物檢查，提供實驗依據。
1 器材
1.1 供試品
白斑酊（江蘇省中醫院製劑室，批號060322）、首烏合劑（江蘇省中醫院製劑室，批號060103）、皮炎洗劑 （江蘇省中醫院，批號051202）。
1.2 菌株
金黃色葡萄球菌CMCC〔CMCC（B）26003〕、大腸埃希菌CMCC〔CMCC（B）44102〕、枯草杆菌CMCC〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌CMCC〔CMCC（F）98001〕和黑曲黴菌CMCC〔CMCC（F）98003〕購自南京市藥檢所。
1.3 儀器
手提壓力鍋（上海三申醫療器件有限公司）；恒溫培養箱（餘姚縣恒溫箱廠）；電熱恒溫培養箱（南京實驗儀器廠）。
2 方法與結果
2.1 菌液製備
取經37℃培養18～24 h的金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、枯草杆菌肉湯培養物1 ml加入9 ml無菌生理鹽水作10倍稀釋，稀釋至10-5～10-7，細菌數約為50～100 cfu/ml，備用。接種白色念珠菌的新鮮培養物置改良馬丁培養基中，23～28℃培養24～48 h，後用0.9%滅菌生理鹽水稀釋製成50～100 cfu/ml，備用。取經20～25℃培養1周的黑曲黴斜麵培養物，加水3～5 ml，洗下黴菌孢子，用帶有棉花的球形吸管取出菌液，用標準比濁管比濁後，用無菌生理鹽水稀釋為50～100 cfu/ml，備用。
2.2 供試液的製備
樣品10 ml，加入90 ml pH7.0的氯化鈉蛋白腖緩衝液，製成1∶10的供試液備用。
2.3 培養基稀釋法 采用0.5，0.4，0.3，0.2，0.1 ml/皿的供試液，加15～20 ml瓊脂培養基做細菌記數，測定回收率。
2.4 回收率測定試驗組：取上述供試液加入菌液（50～100 cfu/ml試驗菌），立即傾注瓊脂培養基，平行製備兩個平皿，按《中國藥典》2005版培養及菌落記數方法測定其菌落數。菌液組：測定加入的試驗菌數。供試品對照組：取規定量供試品，按菌落記數法測定供試品本底菌數。供試品組：考察供試品製備過程中微生物影響的程度。實際收入驗時，加入上述5種試驗菌株，使最終菌液濃度為50～100 cfu/ml。
2.5 結果
2.5.1 常規法測定3種製劑的回收率用常規法測定3種製劑回收率試驗（見表1及表2），白斑酊、首烏合劑2種供試品試驗菌的回收率均高於70%，證明無抑菌現象。皮炎洗劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌的回收率低於70%。表1 3種製劑常規法驗證試驗回收率（略）表2 3種製劑常規法驗證實驗回收率（略）
2.5.2 培養基稀釋法培養基稀釋法測定皮炎洗劑的微生物限度的驗證實驗（見表3），結果回收率達70%以上（0.2ml/皿供試品）。表3 培養基稀釋法測定皮炎洗劑的微生物限度實驗（略）
3 討論
本次實驗證明白斑酊、首烏合劑對5種陽性對照菌的常規法的回收率均高於70%，因此常規法可用於上述2種製劑的微生物限度檢查，皮炎洗劑由於含有抑菌成分，須采用培養基稀釋法（0.2 ml/皿）進行微生物限度檢查。
醫院製劑由於其形成的特殊性，一般成分較複雜，許多成分都有不同程度的抑菌作用，通過驗證來確立各製劑的微生物檢驗方法是十分必要的。
【參考文獻】
［1］國家藥典委員會. 中國藥典，Ⅰ部［S］. 北京：化學工業出版社，2005：附錄71.
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