【摘要】 目的 建立康腹止瀉片微生物限度檢查法。方法 采用培養基稀釋法。結果 該法能有效消除康腹止瀉片在檢驗條件下對細菌、真菌及酵母菌的抑製作用;控製菌可用常規法檢查。結論 該法簡單、快捷，可用於康腹止瀉片的微生物限度檢查，有效控製其質量。
【關鍵詞】 康腹止瀉片;微生物限度檢查;培養基稀釋法
1 儀器與試藥
1.1 菌種
金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均購自中國藥品生物製品檢定所;黑曲黴(ATCC16404)購自廣東省微生物研究所。
1.2 培養基
營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養基、營養肉湯培養基、改良馬丁培養基、改良馬丁瓊脂培養基、膽鹽乳糖培養基。
1.3 供試品
康腹止瀉片(批號41EA1)，大幸藥品株式會社。
2 方法與結果
2.1 菌液的製備[4]
取新鮮培養物接種至營養肉湯培養基中，培養18～24 h;培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1 mL含菌數為50～100 cfu的菌懸液。用於控製菌驗證時製成每1 mL含菌數為<100 cfu的菌懸液。
2.2 供試液的製備
取樣品10 g，加入pH7.0氯化鈉蛋白腖緩衝液至100 mL，用勻漿儀打碎，搖勻，製成1∶10的供試液。
2.3 驗證試驗
驗證實驗所用培養基均按《中國藥典》2010年版附錄“微生物限度檢查法”要求，進行培養基適用性檢查，且均符合規定。
試驗組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL和試驗菌液1 mL，分別注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，按平皿法測定其菌數。
菌液組:取試驗菌液1 mL注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養基，每株試驗菌平行製備2個平皿，測定所加的試驗菌數。
供試品對照組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL，按試驗組操作，不加菌液，測定樣品本底菌。
計算各試驗菌株的回收率，結果見表1。表1 計數驗證菌各菌株回收率結果
由表1可見:黑曲黴的回收試驗，當供試液為1 mL·皿-1時，3次試驗的回收率均即可達到70%以上;白色念珠菌當稀釋至0.5 mL·皿-1時，3次試驗的回收率達到70%以上;而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌3個菌株的回收率試驗，要稀釋至0.2 mL·皿-1，3次驗證的回收率才能均達到70%以上。因此本品的細菌計數、真菌及酵母菌計數均可用培養基稀釋法檢查:細菌計數用0.2 mL·皿-1，真菌及酵母菌計數用0.5 mL·皿-1。
由表2可知，試驗組均檢出大腸埃希菌，因此本製劑的大腸埃希菌和大腸菌群均可用常規法檢查。
4 討論
本品含有木餾油、阿仙粉、黃柏粉等成分，有一定的抑菌作用，驗證試驗結果證明，本品對革蘭陽性菌有較強的抑製作用。藥典收載的除去供試品抑菌作用的方法有培養基稀釋法、薄膜過濾法、離心沉澱法等，或幾法聯用。由於本品是中成藥，推斷其抑菌作用不會太強，因此嚐試采用培養基稀釋法，通過擴大培養基的使用量，使供試品在培養基中稀釋，結果各規定菌株的回收率均達到藥典要求;控製菌則用常規法即能順利檢出試驗菌。培養基稀釋法操作簡單，不需要特殊儀器設備，隻需增加培養基量，即可很好地消除本製劑在試驗條件下的抑菌作用問題，因此本方法簡便快捷、準確有效，能很好地控製康腹止瀉片的質量。表2 控製菌驗證結果
作者：朱文娟，林鐵豪，鍾燕飛，林麗英
【參考文獻】
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[3] 許華玉，杜鵑，湯楊.藥品中微生物汙染檢測方法驗證的必要性[J].中國藥品標準，2005,6(4):262,46-47.
[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:附錄79.
[5] 林麗英,湛文青,饒春意.野牡丹止痢片微生物限度檢查法的建立[J].中藥材,2006,29(3):299-302.
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