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λ噬菌體的大規模培養:低倍數感染



錄入時間:2011-9-23 16:47:45 來源:生物在線

一、材料:

1、緩衝液和溶液:

SM

氯仿

2、培養基:

NZCYM

3、載體和菌株:

高滴度的λ噬菌體原種

4、離心機和轉子:

Sorvall  SS-34或相當型號

5、專用設備:略

二、方法:

1、  接種大腸杆菌適宜菌株的單菌落至分裝在500ml錐形瓶的100mlNZCYM中,37℃劇烈振蕩培養過夜。

2、  測定培養物的OD600值,以1OD600=1×109個細胞/ml計算細胞濃度.

3、  取4份樣品,每份含1010個細胞,4000g(5800r/min 於Sorvall  SS-34)室溫離心10min,去上清。

4、  將每份細菌沉澱用3ml SM懸浮。

5、  加入適當數量的感染性噬菌體顆粒,振蕩使噬菌體充分分散於整個培養物中。

6、  將感染培養物37℃溫育20min,間或搖晃。

7、  將每份感染樣品加入到預熱至37℃的500ml NZCYM(於2L 燒瓶中),37℃劇烈振蕩培養(300r/min).

8、  8h後開始監視培養物的裂解情況。伴隨著細菌和噬菌體的生長,8-12h後裂解發生,如果觀察大裂解發生,轉入步驟10.

9、  假如12h後裂解不明顯,取小量培養物樣品,檢查噬菌體的生長情況。

a.  取兩份感染培養物樣品(每份1ml)至玻璃試管中。

b.  每管中加入1至2滴氯仿(約50-100ml),37℃培養5-10min,間或搖晃。

c.  將每管置光線下比較培養物的外觀。如果接近完全感染但細胞還沒有裂解,氯仿將導致細胞破裂,從而使混濁的培養物變為透明。在這種情況下,轉入步驟10.

10、每個燒瓶中加入10ml氯仿,37℃繼續振蕩培養10min。

11、將培養物冷卻至室溫,隨之用方案6所述沉澱噬菌體顆粒。

 

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