NASBA（nucleic acid sequence-based amplification）是一項持續等溫的核酸擴增技術，特別適合於以RNA為模版的擴增，與其它常用禽流感病毒檢測方法（病毒培養法、免疫學方法和PCR）相比，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便等特點。就NASBA的操作原理及其在禽流感病毒檢測中的成功應用進行綜述。NASBA不僅成為禽流感病毒檢測的有力工具，而且對於其它惡性傳染病的監測、檢測同樣具有重要價值和意義。
常用方法：病毒培養法、免疫學方法和核酸檢測方法。
病毒培養法是廣泛應用的實驗室檢測方法之一，靈敏度高，但操作費時（7~10天），而且對實驗室條件的要求也較高。與之相比，免疫學方法相對快速簡便，但靈敏度和特異性差。而且抗體檢測的結果僅僅說明被檢測的禽類或動物曾經感染過禽流感病毒，而不能準確反映當前是否感染或攜帶病毒，因此，在應用方麵具有一定的局限性。特別是目前的家禽大多被注射疫苗免疫，則不能使用該方法進行篩查。核酸檢測方法（如PCR）用於AIV的檢測，靈敏度高且快速，能夠準確反映是否攜帶病毒，可結合其它檢測方法加以進一步判定。與常規PCR相比，熒光實時PCR（realtime PCR）技術檢測禽流感病毒，其靈敏度有很大提高，但是對於某些超低病毒載量的樣品，仍不能達到檢測要求。
NASBA：NASBA技術檢測禽流感病毒NASBA（nucleic acid sequencebased amplification）是一項以核酸為模板的快速等溫擴增技術。這項技術特別適用於RNA分子的檢測。自2002年首次在國際性刊物上發表了關於應用NASBA技術檢測禽流感病毒的論文以來，迄今已成功開發出針對A型禽流感病毒所有亞型（H1-H15）（NASBA-AIV）和特異性針對H5亞型（NASBA-H5）、H7亞型（NASBA-H7）的禽流感病毒的NASBA/ECL檢測試劑盒。已正式發表的實驗數據顯示，NASBA技術比目前商品化的免疫檢測試劑盒敏感10~1000倍，比常規PCR方法也敏感許多，與現行的病毒培養的檢測方法靈敏度相當。但是，病毒培養通常需要一周以上的時間才能得到結果，而NASBA技術常規僅需要4~6小時就可以準確地得到結果，便於盡早采取防治措施，不僅如此，該技術操作簡便，自動化水平高，可以減少人為造成的誤差，而且還是一種高通量的方法，可以同時檢測50個樣本，非常適用於大規模樣品的篩查。
技術原理：NASBA技術使用3種酶（逆轉錄酶、RNA酶H和T7 RNA聚合酶）以及2條特別設計的寡核苷酸引物：在RNA模板（sense RNA）提取後，經過引物（oligo P1和primer P2）和2次連續逆轉錄酶反應，在同溫度條件下進入線性擴增循環，產物直接為單鏈反義RNA（anti-sense RNA）。NASBA技術與逆轉錄（RT）-PCR檢測RNA不同。RT-PCR在檢測RNA時，必先利用逆轉錄酶形成cDNA，然後利用溫度階梯進行循環擴增，產物為cDNA，引物次序包含於終產物中。而NASBA技術可直接擴增RNA，是連續等溫度擴增，產物為單鏈RNA，引物次序不包含於終產物中。
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