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植物病毒抗血清效價的測定



錄入時間:2011-11-1 14:39:13 來源:生物在線

一、目的
 
    抗血清的效價,也稱為滴定度,是抗血清中抗體含量的相應近似值,是抗血清質量的主要指標之一,由能和最少的病毒發生可見反應的血清的最大稀釋度來表示,稀釋度越大則效價越高。
    測定抗血清效價有多種方法,常用於各種沉澱反應法,如試管沉澱反應、微量沉澱反應、免疫擴散反應;也有人用酶聯反應等其他方法。本實驗學習最常用的微量沉澱反應法測定抗血清的效價。
 
二、實驗步驟和用具
 
1. 未經免疫的正常血清和抗血清
2. 提純病毒懸浮液
3. 0.85% NaCl( 生理鹽水 ), 0.01M磷酸鹽緩衝液加 0.85 %NaCl ( PBS緩衝液 ) 。
4. 塑料培養皿、特種鉛筆、注射器和皮下注射針頭、吸管、微量離心管。
 
三、實驗步驟
 
1. 在塑料培皿內用特種鉛筆劃成約 7 ×7mm 的方格
2. 在微量離心管中用生理鹽水配成血清係列稀釋液1ml,1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,…,1/1024
3. 用PBS配製病毒係列稀釋液1ml,1,…,1 ∶128
4. 用注射器按順序每格各放一滴血清和抗原,作好標記。注意:先放血清,後放病毒;濃度由低到高;保持每滴大小一致。加樣後緩慢晃動培養皿使混勻。並設置正常血清作對照;樣品可以按照附圖排列。
5. 從培皿邊緣慢慢倒入石臘油,使均勻覆蓋。
6.  室溫下或25oC下放置2小時後觀察記載,24小時後作第二次觀察記載。可在解剖鏡下進行,用暗視野或將背景調暗觀察。
7. 觀察沉澱生成時,目測五級標準分別記載為 +++,++,+,±,-,以出現+的最大血清稀釋度為血清效價。
 
注意:長條形病毒形成不定形雲霧狀沉澱;球形病毒形成顆粒狀絮凝沉澱。

 

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