把電泳技術與免疫雙擴散技術結合起來的方法稱為免疫電泳,有不同類型,本試驗介紹微量免疫電泳,用於病毒鑒定。
1.實驗材料和用具
(1)抗血清
(2)提純病毒
(3)0.025M磷酸鹽緩衝液(PB)、pH7.0,10%NaN3,1.5%SDS,瓊脂糖(電泳用)。
(4)載玻片、打孔器、開槽刀片、針頭、微量加樣器、飯盒、電泳儀和水平電泳槽、25℃溫箱。
2.實驗步驟
(1)洗淨載玻片,泡在乙醇中,使用前取出擦幹備用。
(2)用緩衝液配製1%瓊脂糖液,煮化後加入0.02%NaN3,80℃水浴中備用。
(3)在微量離心管中將等量的1.5%SDS和提純病毒混勻,開水浴中煮2-4分鍾備用。
(4)用吸管吸取2ml瓊脂糖液,加在載玻片上,注意保持液麵水平,分布均勻,厚度為2mm,室溫下放置10分鍾,移入飯盒保濕,繼續放置30分鍾使其充分凝固。
(5)在凝膠上打孔和開槽,並做正負極記號。
(6)去掉孔內凝膠,在孔中加入SDS處理過的病毒懸浮液,注意不要溢出。
(7)將玻片放入水平電泳槽,以0.025M PB pH7.0為電泳緩衝液,電流量為3-5mA/片,電泳40分鍾。
(8)電泳後取出玻片用針將槽內凝膠去掉。
(9)在槽內加入血清,飯盒內保濕,25℃下孵育20-40小時觀察沉澱線的形成。
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