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植物病毒血清學檢測—膠乳凝聚反應



錄入時間:2011-11-2 15:16:04 來源:互聯網

     病毒的抗體吸附在一種與免疫無關的大顆粒表麵,然後與相應的抗原結合,出現明顯可見的凝聚反應,顆粒可有不同種類,這裏介紹致敏膠乳毛細管凝聚反應。

   1.實驗材料和用具

    (1)特異性抗體致敏膠乳
    (2)係統感染病毒的植株和健康植株
    (3)0.1M Tris(緩血酸胺)+0.85 %NaCl緩衝液,pH7.4
    (4)毛細管、研缽、微量離心管、玻片、膠布、台式離心機

  2.實驗步驟

    (1)取顯症葉片,用緩衝液配成1 ∶10和1 ∶20 的懸浮液,5000轉離心5分鍾備用,同樣方法製備健康對照植物的汁液。
    (2)致敏膠乳用前搖勻,用毛吸管吸取致敏膠乳,約長1cm。
    (3)用已吸取膠乳的毛吸管再吸取病毒懸浮液約長2cm,使抗原與膠乳用量為2 :1,注意兩液之間不能有氣泡,同樣方法做對照。
    (4)將毛細管按設計順序排列在玻片上,用膠布條固定,做好標記,並用濾紙吸去管外多餘液體。
    (5)在室溫下孵育 15-30 分鍾,此期間來回顛倒數次,使膠乳和病毒懸浮液充分混合。
    (6)解剖鏡或低倍顯微鏡下觀察並記載凝聚物生成情況。

    記錄按五級記載:0 -無凝聚物;1-不易辨別的類似凝聚物;2 -凝聚物小而少;3-凝聚物多;4-凝聚物多而大。2 以上為陽性反應。

 

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