病原性球菌主要指葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌及淋球菌。
這些細菌經常引起人類的化膿性疾病,故又稱化膿性球菌。
在臨床進行微生物學檢查時,根據這些細菌各不相同的形態、染色、培養等特點,即可做出初步診斷。
當難以確定它們的致病性或耐藥性時,則需作進一步的實驗來鑒定。
一、病原性球菌的形態觀察
【材料】葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎球菌、淋球菌的革蘭染色片及肺炎鏈球菌的莢膜染色片。
【方法】
鏡檢上述各示教片,注意各菌的形態、排列、染色性以及肺炎球菌的莢膜。
二、病原性球菌的培養物觀察
【材料】金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌,甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血瓊脂平板及腦膜炎球菌在巧克力色血瓊脂平板上的24小時培養物。
【方法】
1、觀察金黃色、表皮和腐生葡萄球菌在血平板上的生長情況,注意菌落的色素及溶血性。
2、觀察甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血平板上的生長情況,注意菌落大小、表麵、透明度及溶血性。比較甲鏈和肺炎鏈球菌的菌落有無區別。
3、觀察腦膜炎球菌在巧克力色血平板上的生長情況,注意菌落表麵、透明度。
三、致病性葡萄球菌的鑒定
絕大多數致病性葡萄球菌具有如下特點:
1、產生金黃色色素。
2、對家兔或綿羊紅細胞有溶血作用。
3、厭氧條件下分解甘露醇產酸不產氣。
4、血漿凝固酶試驗陽性。
(一)血漿凝固酶試驗(試管法)
血漿凝固酶是致病性葡萄球菌產生的,可使含有肝素或枸椽酸鈉抗凝劑的人或兔血漿發生凝固的酶類物質,是判斷葡萄球菌致病性的最重要指標。遊離凝固酶用試管法檢測,結合凝固酶用玻片法測試。
【材料】金黃色及檸檬色葡萄球菌24小時肉湯培養物、無菌肉湯、兔血漿(1:2)、生理鹽水、試管、吸管等。
【方法】
1、於三支小試管中各加1:2兔血漿0.5ml。
2、三管分別加金黃色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌和無菌肉湯各0.5ml。
3、將試管置37℃溫箱,每半小時觀察一次(觀察時將試管稍微傾斜)。於3小時內出現凝固者為陽性,一般均於1小時左右凝固。
【結果】
凡血漿呈現膠凍狀為陽性,仍呈液狀為陰性。
(二)血漿凝固酶試驗(玻片法)
【材料】葡萄球菌24小時培養物、兔血漿、生理鹽水、玻片等。
【方法】
1、取清潔玻片一張用蠟筆劃分成二格,各加生理鹽水2接種環。
2、用接種環分別取葡萄球菌菌落少許在鹽水中磨勻,使成濃厚而均勻的細菌懸液。
3、於其中一格加兔血漿1接種環,另一格加生理鹽水1接種環。
4、1-2分鍾後觀察結果,如血漿凝固呈顆粒狀,而鹽水側仍呈均勻混濁者,表示結果陽性,如二格都無凝固現象出現者為陰性。
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