超廣譜β-內酰胺酶的測定 Detection of extended -spectrum β-lactamases (ESBLs)
超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs) 是指由質粒介導的、能賦予細菌對頭孢菌素類(如頭孢曲鬆、頭孢噻肟、頭孢他啶)和單酰胺類(氨曲南)以及青黴素類抗生素耐藥的一類酶。β-內酰胺酶不僅對某些抗生素的作用和地位帶來威脅，還對感染性疾病的治療和人類健康產生嚴重的影響。 由於部分產 ESBLs 菌株在常規體外藥敏試驗中，對含氧亞胺基的頭孢菌素和氨曲南等抗生素可能表現為敏感，而在感染患者體內卻耐藥，常造成臨床治療失敗。 目前用於超廣譜β-內酰胺酶篩選的試驗主要有初篩試驗和表型確證試驗(包括E 試驗法) ，另外還有產色素頭孢菌試驗等。 超廣譜β-內酰胺酶檢測主要用於大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌和奇異變形杆菌。
（一） 初篩試驗和表型確證試驗
初篩試驗和表型確證試驗均有紙片法和稀釋法兩種，這裏以紙片法為例來解釋初篩試驗和表型確證試驗的檢測。
1.初篩試驗 按常規紙片擴散法在 M-H 平板上塗布好待檢菌，貼頭孢曲鬆 30μg/片(或頭孢噻肟 3 0 μg/片，或頭孢他啶30μg/片，或氨曲南 30μg/片，或頭孢泊肟 10μg/片;使用一種以上的藥物可以增加檢出敏感度) ， 35℃孵育 18 ~20 h 。 結果判斷: 頭孢泊肟≦17 mm，頭孢他啶≦22 mm，氨曲南≦27 mm，頭孢噻肟≦27 mm，頭孢曲鬆≦25 mm，提示可能產生 ESBLs。
注：進行 ESBLs 初篩試驗，肺炎克雷伯菌 ATCC700603 可以提供質量評估(例如培養、能力或試驗效果) 。
肺炎克雷伯菌 ATCC700603 或大腸埃希菌 ATCC25922 可以用於常規的質量控製(例如每周或每日) ，對於肺夾克雷伯菌 ATCC700603 ，頭孢泊肟抑菌圈 9 ~16 mm，頭孢他啶抑菌圈 10~ 18 mm，氨曲南抑菌圈 9 ~17mm，頭孢噻肟抑菌圈 17 ~25 mm，頭孢曲鬆抑菌圈 16~24 mm。
2 . 表型確證試驗 按標準紙片擴散法藥敏試驗，將菌液塗布到M- H 平板後，分別貼頭孢他啶(30μg)和頭孢他啶/克拉維酸(30μg/ 10μg) 紙片，或頭孢噻肟(30μg) 和頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/ 10μg) 紙片(確證實驗需要同時使用頭孢他啶和頭孢噻肟，單獨和聯合克拉維酸複合試劑) ，各紙片之間的間距≧24 mm。35℃ 孵育 18 ~20 h ，觀察結果。 2個藥物中有任何一個，在加入克拉維酸後，抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈相比，增大值≧ 5mm 時，即判定為產 ESBLs( 如：頭孢他啶的抑菌圈為 16 mm，頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈為21 mm) 。
注：進行 ESBL 確診試驗時，需要測試肺炎克雷伯菌 ATCC700603 和大腸埃希菌 ATCC25922( 每周或每日) 。 對於大腸埃希菌 ATCC25922 ，所測試的藥物聯合克拉維酸的複合製劑後的抑菌圈與單藥的抑菌圖相比，增大值當在≦2mm。 對於肺炎克雷伯菌 ATCC700603 ，頭孢他啶聯合克拉維酸的複合製劑的抑菌圈，與單獨的頭抱他咬的抑菌圈相比，增大值≧5 mm，頭孢噻肟聯合克拉維酸的複合製劑的抑菌圈，與單獨的頭孢噻肟的抑菌圈相比，增大值≧3 mm。
（二）E 試驗法篩選試驗
屬於表型確證試驗。 按紙片瓊脂擴散法製備菌液和接種平板，待菌液稍幹，將 ESBL 試條貼於平板上，有刻度麵朝上，35℃ 孵育 18~24 h 後，讀取試條兩端的 MI C 值，頭孢他啶與頭孢他啶十克拉維酸或頭孢噻肟與頭孢噻肟+克拉維酸的比值≧8. 判定 ESBLs 陽性，否則陰性。
（三） 產色頭孢菌素試驗
原理：頭孢酶紙片是浸有色原底物的頭孢菌素，即頭孢硝噻吩的紙片，當β-內酰胺酶水解當β-內酰胺環中的氨基鍵時，此化合物發生快速的顏色變化，由黃變紅為陽性。
方法：將待檢菌株塗在含產色頭孢菌素(nitrocefin. NI)的試紙條上，如該菌株產當β-內酰胺酶，則在 10 min 之內，試紙上塗有細菌的部位顏色由黃變紅。 這是一個快速定性檢測當β-內酰胺酶的方法，陽性結果說明該菌產當β-內酰胺酶，但不一定是 ESBLs。
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