一、實驗目的：
學習用血球計數板計數酵母數量的方法，
二、實驗原理：
啤酒發酵時，必須接入一定數量的酵母細胞；在發酵過程中，為了跟蹤發酵的進程，判斷發酵是否正常，也有必要測定懸浮酵母細胞的濃度。酵母菌的計數常用血球計數板方法。血球計數板是一塊長方形的玻璃板，被四條凹槽分隔成三個部分，中間部分又被一橫槽隔成上下兩半，每一半上各刻有一個方格網，方格網的邊長為3mm,分為9個正方形大格，每一大格為1mm2,其中中間那個大格被橫向和縱向的雙線分成25（或16）個中格，每個中格又被單線分成16（或25）個小格，因此一個大格中共有25×16=400個小格。這樣的一個大格就是一個計數室。由於計數室比板表麵要低0.1mm,因此蓋上蓋玻片後，整個計數室的容積就是0.1 mm3,相當於0.0001mL。
計數時，先讓計數室中充滿待檢溶液，然後計數400個小格中的細胞總數，就可換算出1mL發酵液中的總菌數。
三、實驗器材：
顯微鏡，血球計數板，蓋玻片等。
四、實驗步驟：
1. 取清潔的血球計數板一塊，平放於桌麵上，在計數室上方加蓋專用蓋玻片；
2. 取酵母菌液（發酵液）一小滴，滴至蓋玻片的邊緣，讓菌液滲入計數室內，注意計數室內不能留有氣泡。
3. 靜置5分鍾，讓酵母細胞穩定附著於計數室內；
4. 將計數板置於顯微鏡的載物台上，先用低倍鏡找到計數板的方格網，並移至視野中間（尋找時可通過縮小光圈，降低聚光鏡，開低電源電壓等方式減少進光量，使視野稍偏暗）；
5. 找到計數室位置（中間一個大方格），並看清由雙線包圍的中方格（16或25格）及由單線包圍的小方格（共400格）；
6. 計數大格內的酵母細胞總數，必要時可在高倍鏡下觀察。
若酵母細胞過多，可采取
（1）：稀釋後再計數；
（2）：有代表性地選擇左上，左下，右上，右下，中間五個中方格，計數其內的菌數，求得每個中格的平均值，然後乘以中方格數（25或16），即得每個大格內的細胞總數；
（3）：在上述5個中方格中選擇處於頂角的4個小方格，計數，計算20個小方格中的總菌數，再乘以20，即得大格內的細胞總數。
7. 計算：
酵母細胞數/mL=大格中的細胞總數×10000×稀釋倍數
8. 血球計數板的清洗：
將血球計數板立即用流水衝洗幹淨，若菌液變幹，酵母細胞被固定在計數板上，則很難用流水衝洗幹淨，必須用優質脫脂棉濕潤後輕輕擦洗，再用流水衝洗幹淨，涼幹
五、注意事項：
1. 血球計數板的計數室內刻度非常精細，清洗時切勿用試管刷或其它粗糙物品擦拭。
2. 加樣前，應先放好蓋玻片，讓菌液自然吸入。如果先加菌液，則由於蓋玻片較輕，可能會浮在菌液上，這樣，計數室內的容積就不再使0.0001mL了。因此，為了使結果更加準確，最好不要用普通的蓋玻片來替代。
3. 計數時，為避免重複或遺漏，對壓在方格線上的細胞，應遵循數上不數下，數左不數右的原則（即凡壓在上部或左麵線上的細胞，都應計數入內，凡壓在下部或右麵線上的菌體，都應忽略不計）。對出芽細胞，如果子細胞大於母細胞的一半，則應算作兩個細胞。
六、思考題：
計數時，發現計數板不幹淨，怎樣快速地清洗計數板？
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