細菌的單染技術

簡單染色通常隻用一種染色劑，使細菌整個細胞染上顏色。但看不清結構。所以隻便於檢查細菌的形態、大小和排列方式等。
【實驗目的】
1、掌握單染色的操作技術
2、觀察細菌的基本形態
【實驗原理】
單染色即用單純的種染料進行染色，多數采用美藍、結晶紫或石碳酸複紅等堿性染料。此法僅能顯示細胞的外部形態，而不能辨別其內部結構。染色前必須將細胞固定，其目的是殺死細菌，並使它粘附在載玻片上。此外，還可以增加菌體對染料的親和力。常用的有加熱和化學固定兩種方法。無論用哪種方法都應盡量使細菌維持原有的形態，防止細胞膨脹或收縮。
【實驗材料、藥品及器具】
1、菌種 大腸杆菌（Escherichia coli）
枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）
2、染色液 石炭酸品紅染色或結晶紫染色液（Stining Solutions）
3、無菌水
4、洗瓶裝蒸餾水
5、洗淨的載玻片（Slicle）5片
6、顯微鏡、香柏油、接種環、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯
【實驗步驟】
1、塗片：取一片幹淨無油載玻片，在其中央滴一滴無菌水，然後用接種環以無菌操作方法取少許培養好的大腸杆菌，放在載玻片的水滴中塗勻，注意菌量不宜過多，否則，不易看清單個菌體。
2、固定：將塗好的玻片在空氣中風幹或火焰上通過3～4 次，使水份蒸發，此時細菌菌體緊貼在玻片上。
3、染色：用石炭酸品紅或結晶紫染色劑30~60S，然後用洗瓶輕輕衝洗染色劑（注意不要直接衝洗染色部位），直至無多餘的染液，晾幹或用吸水紙從旁吸幹或用微火烘幹。
4、用同樣方法將枯草芽孢杆菌製作一張塗片。
5、鏡檢：首先在低倍鏡下找到物像，然後在塗膜中央滴一滴香柏油，換成油浸鏡觀察兩個菌種的形態和排列。
6、去除油鏡上的香柏油：先用幹淨的擦鏡紙擦2-3 次，再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油，最後用擦鏡紙擦幹。擦鏡頭時應順著鏡頭直徑方向擦，不要沿著圓周方向擦。
【實驗結果】
1、繪製觀察到大腸杆菌和枯草芽孢杆菌的形態圖，並注明放大倍數。
2、用文字描述兩菌株的細胞形態。
【思考題】
1、塗片在染色前為什麽要先進行固定？固定時應注意什麽問題？
2、製片為什麽要完全幹燥後才能用油鏡觀察？
3、製片時應注意哪些事項？為什麽？

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