細菌的革蘭氏染色

革蘭氏染色是細菌鑒定上一個最重要和廣泛應用的方法。根據此法染色結果可將細菌分成兩大類。一類細菌能夠保留初染色劑（結晶等）於細胞中，不受脫色劑（酒精）的影響，而最後細菌被染成紫色或深藍色者稱為革蘭氏陽性（Gram-positive）；另一類細菌可因脫色劑的作用而洗出結晶紫，然後被另一染色劑（藏紅花）染成紅色，稱為革蘭氏陰性（Gram-negative）。也有一些菌種革蘭氏染色是可變的。
【實驗目的】
了解革蘭氏染色的原理，並掌握革蘭氏染色法的操作技術。
【實驗原理】
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884 年由丹麥醫師Gram創立。
細菌先經堿性染料結晶紫染色，再經碘液媒染（以增加染料與細胞的親和力）後，用酒精或丙酮脫色，再用複染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽性菌（G+）；被脫色後又被染上複染劑的顏色者為革蘭氏陽性菌（G-）。此法可將細菌分為兩大類。
革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞壁成分和結構不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多的類脂質，而肽聚糖的含量較少。當用乙醇或丙酮脫色時，類脂質被溶解，增加了細胞壁的通透性，使初染後的結晶紫和碘的複合物易於滲出，結果細胞被脫色，經複染後，又染上複染液的顏色；而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖的含量多且交聯度大，類脂質含量少，經乙醇或丙酮洗脫後，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此，細胞仍保留初染時的顏色。
【實驗材料、藥品及器具】
1、菌種 大腸杆菌（Escherichia coli）
枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）
金黃色葡萄球菌（Staphylococeus auresu）
2、染液 草酸銨結晶紫液
革蘭氏碘液
95%的酒精
藏花紅液
3、器皿洗淨的載玻片6 片、顯微鏡、酒精燈、接種環、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水
【實驗步驟】
1、取培養12-24h的大腸杆菌、枯草芽孢杆菌和金黃色葡萄球菌分別塗片、固定。
2、加草酸銨結晶紫染色劑一滴，染色1 分鍾。
3、傾去染液並用洗瓶裝水輕輕衝洗。

上一篇：細菌的單染技術

下一篇：細菌澱粉酶和過氧化氫酶定性實驗及其生化特征觀察