真菌是一大類不含葉綠素，無根、莖、葉，由單細胞或多細胞組成的真核細胞型微生物。大部分真菌對人類有益，能引起人類疾病的病原性真菌主要包括淺部真菌和深部真菌。
實驗目的：
觀察真菌的基本形態及菌落特點，了解淺部及深部真菌的檢查方法。
實驗內容：
一、常見單細胞真菌的形態觀察
1、新型隱球菌墨汁負染色片：可見菌體呈球形，大小不一，有很厚的莢膜，包圍在菌體周圍，透明發亮，並可見發芽的菌體。
2、白色念珠菌菌體形態：用患者的棉拭子標本常法塗片，革蘭氏染色，鏡檢。顯微鏡下可見菌體呈卵圓形，較葡萄球菌大2-5倍，細胞出芽伸長而成假菌絲，在假菌絲生長點上有芽生孢子及沿假菌絲頂端生長的大而圓的厚膜孢子。
二、皮膚絲狀菌的檢查
材料：
病人的甲屑、皮屑或毛發、10%KOH溶液、載玻片、蓋玻片、小鑷子、普通光學顯微鏡等。
方法：
1、采標本：用鈍刀在手、足、體癬損害部位邊緣輕輕刮取皮屑，甲癬可用小刀刮取病損指（趾）甲深層碎屑。
2、製片：用小鑷子取少許皮（甲）屑標本置於載玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一蓋玻片，在火焰上緩慢加熱，以加速角質溶解，使標本透明，然後輕輕加壓使成薄片，驅走氣泡並吸去周圍溢液。
3、鏡檢：先用低倍鏡觀察有無真菌菌絲或孢子，再用高倍鏡觀察菌絲、孢子的特征。鏡檢時光線應稍弱，使視野稍暗。陽性標本常可查見分支菌絲或孢子。
三、真菌的培養
材料：
菌種、沙保氏培養基、平皿、載玻片、蓋玻片。
方法：
1、一般培養：分別將新型隱球菌、白色念珠菌、絮狀表皮癬菌接種於沙保氏培養基，於22℃-28℃下培養（深部真菌可培養於37℃環境），一周後觀察菌落特征。真菌菌落在形態上可分為三大類：
酵母型菌落：與細菌菌落相似，圓形、白色、邊緣整齊、表麵光滑濕潤。
類酵母型菌落：同酵母型菌落，圓形、較大、白色，但菌落根部有假菌絲長入培養基內。
絲狀菌落：是多細胞真菌的菌落形式。有許多疏鬆的菌絲體構成，菌落呈棉絮狀、絨毛狀或粉末狀，菌落中央有皺折，外圍有放射狀溝。其正麵和背景又可顯示各種不同顏色。
2、小培養（玻片法）：在無菌平皿中先傾注10-15ml沙保葡萄糖瓊脂，待凝固後，無菌操作將瓊脂切成約0.5cm的方塊，再將瓊脂塊移放在滅菌的載玻片上，然後在小塊培養基四邊接種已分純的真菌菌種，蓋上無菌蓋玻片，移入有一定濕度的無菌平皿內，置22℃-28℃孵育。動態觀察生長過程，根據菌絲和孢子的特點鑒定真菌類別。
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