一、滅菌
1有菌範疇：凡是暴露的物體，接觸水源的物體，其表麵都有菌。依此未處理的無菌室、超淨台表麵、未滅菌的培養基、容器表麵、接種刀剪、身體外表及呼吸道等，都是有菌的。
2菌的種類及特點：包括細菌、真菌、放線菌、藻類及其它微生物。其特點是：極小，肉眼看不見。無處不在，無時不有，無孔不入。忍耐力(熱、射線、酸堿、有毒藥劑等)強，生活要求簡單，繁殖力極強。
3無菌範疇：經高溫灼燒或一定時間蒸煮等物理方法處理，或化學藥劑處理，高層大氣、岩石內部、健康組織內部，強酸強堿，化學元素滅菌劑等。無菌世界要比有菌世界小得多。
4滅菌:指用理化方法，殺死物體表麵和孔隙內的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質全部殺死。
5消毒：指殺死、消除或充分抑製部分微生物，使之不再發生危害作用，即一些不會完全殺死，還有活著的微生物。
6無菌操作：在通過嚴格滅菌的操作空間（接種室、超淨台等）和使用的器皿內，以及操作者外表都不帶任何活著的微生物條件下，進行操作叫做無菌操作。
7組培無菌的要求：必須徹底無菌，比微生物培養還嚴格，因為培養基營養豐富，溫度和濕度等合適。要徹底滅菌，必須根據不同的對象采取不同的切實有效的方法滅菌。
8滅菌方法可分為物理的和化學的兩類：
(1)物理方法：如幹熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（超聲波、微波）、過濾、清洗和無菌水衝洗等措施。
(2)化學方法：升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精等。
一．培養基用濕熱滅菌
培養基在製備後的24小時內完成滅菌工序。
1高壓滅菌原理：在0.1MPa的壓力下，鍋內溫度達
2保證高壓：1)注意完全排除空氣，常用方法是：關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零後，再關閉放氣閥。2)保壓到位，維持壓力0.1～0.15MPa 20min。
因容器不同，保壓時間而不同
表4－１培養基高壓蒸氣滅菌所必需的最少時間
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容器的體積（ml） |
在１２１０Ｃ滅菌所需最少時間（min） |
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２０～５０ |
１５ |
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７５～１５０ |
２０ |
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２５０～５００ |
２５ |
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１０００ |
３０ |
培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間。
3對其它物品滅菌：無菌水、栽培介質、接種用具、濾紙、實驗服、口罩等，可以延長滅菌時間或提高壓力。這些物品用耐高壓塑料袋裝好，或用引報紙或牛皮紙包好。
4引起變化：培養基pH值下降0.2～0.3 單位。培養基中成分單一時pH值變化幅度較大，甚至可大於2個pH單位；升高滲透壓：因鐵使蔗糖水解為單糖，占15％～25％，約升高0.43倍。PH值小和加入活性碳，蔗糖水解增加。
二.無菌操作器械采用灼燒滅菌
對鑷子、剪子、解剖刀、瓶口等用灼燒滅菌。若浸入95%的酒精中，然後再灼燒，效果更好。灼燒要完全徹底。
三.玻璃器皿及耐熱用具采用幹熱滅菌
1原理：利用烘箱加熱到160～180０Ｃ的溫度來殺死微生物，通常采用170０Ｃ持續90min來滅菌。由於在幹熱條件下，細菌的營養細胞的抗熱性大為提高，接近芽孢的抗熱水平，
2處理：先洗淨並幹燥，對工具等要用耐高溫的塑料妥為包紮；滅菌時應漸進升溫；烘箱內放置的物品的數量不宜過多；到時斷電要待充分冷涼，
3特點：耗能源，費時間。成本較低。
四 不耐熱的物質采用過濾滅菌
1適用種類：赤黴素、玉米素、脫落酸和某些維生素由於不耐熱，可用過濾法。
2過濾方法：防細菌濾膜的網孔徑為0.45μm以下，細菌的細胞和真菌的孢子等因大於孔徑而被阻，液量大時，常使用抽濾裝置；液量小時，可用注射器。
