繼代培養
在初代培養的基礎上所獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等,數量都還不多，它們需要進一步增殖，使之越來越多，從而發揮快速繁殖的優勢。
繼代培養是繼初代培養之後的連續數代的擴繁培養過程。旨在繁殖出相當數量的無根苗，最後能達到邊繁邊生根的目的。繼代培養的後代是按幾何級數增加的過程。如果以2株苗為基礎，那麽經10代將生成210株苗。
繼代培養中擴繁的方法包括：切割莖段、分離芽叢、分離胚狀體、分離原球莖等。切割莖段常用於有伸長的莖梢、莖節較明顯的培養物。這種方法簡便易行，能保持母種特性。培養基常是MS0基本培養基；分離芽叢適於由愈傷組織生出的芽叢。培養基常是分化培養基。若芽叢的芽較小。可先切成芽叢小塊，放入MS0培養基中，待到稍大時，再分離開來繼續培養。
增殖使用的培養基對於一種植物來說每次幾乎完全相同，由於培養物在接近最良好的環境條件，營養供應和激素調控下，排除了其它生物的競爭，所以能夠按幾何級數增殖。
在快速繁殖中初代培養隻是一個必經的過程，而繼代培養則是經常性不停的進行過程。但在達到相當的數量之後，則應考慮使其中一部分轉入生根階段。從某種意義上講，增殖隻是貯備母株，而生根才是增殖材料的分流，生產出成品。
1)繼代培養時材料的玻璃化
實踐表明，當植物材料不斷地進行離體繁殖時，有些培養物的嫩莖、葉片往往會呈半透明狀，呈水跡狀，這種現象通常稱為玻璃化。它的出現會使試管苗生長緩慢、繁殖係數有所下降。玻璃化為試管苗的生理失調症。
出現玻璃化的嫩莖不宜誘導生根，因此使繁殖係數大為降低。在不同的種類、品種間，試管苗的玻璃化程度也有所差異，當培養基上細胞分裂素水平較高時，容易出現玻璃化現象。在培養基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質，能夠在一定程度上減輕玻璃化的現象發生。
呈現玻璃化的試管苗，其莖、葉表麵無蠟質，體內的極性化合物水平較高，細胞持水力差，植株蒸騰作用強，無法進行正常移栽。這種情況主要是由於培養容器中空氣濕度過高，透氣性較差造成的，其具體解決的方法為：
（1）增加培養基中的溶質水平，以降低培養基的水勢；
（2）減少培養基中含氮化合物的用量；
（3）增加光照；
（4）增加容器通風，最好進行CO2施肥，這對減輕試管苗玻璃化的現象有明顯的作用；
（5）降低培養溫度，進行變溫培養，有助於減輕試管苗玻璃化的現象發生；
（6）降低培養基中細胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸。
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