實驗目的
1．複習顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術；
2．了解油浸係物鏡的基本原理；
3．掌握油浸係物鏡的使用方法。
實驗內容
1．學習油浸係物鏡的使用方法。
2．用壓滴法觀察酵母菌、枯草芽孢杆菌活菌。
實驗原理
（一）顯微鏡的構造
1．顯微鏡的機械裝置
（1）鏡座和鏡臂 它們是顯微鏡的基本骨架，起穩固和支持顯微鏡的作用。
（2）鏡筒 鏡筒上接接目鏡，下接轉換器，形成接目鏡與接物鏡（裝在轉換器下）間的暗室。
（3）物鏡轉換器 物鏡轉換器上可安裝 3—4個接物鏡，可以按需要將其中的任何一個接物鏡和鏡筒接通，與鏡筒上麵的接目鏡構成一個放大係統。
（4）載物台 用於安放玻片。載物台中央有一孔，為光線通路。在台上裝有彈簧標本夾和推動器，其作用為固定或移動標本的位置，使得鏡檢對象恰好位於視野中心。
（5）推動器 是移動標本的機械裝置。
（6）調焦裝置 即粗螺旋和細螺旋，是移動鏡筒調節接物鏡和標本間距離的機件。
2．顯微鏡的光學係統
（1）反光鏡 由一平麵和另一凹麵的鏡子組成，可以將投射在它上麵的光線反射到聚光器透鏡的中央，照明標本。
（2）聚光器 在載物台下麵，它是由聚光透鏡、虹彩光圈和升降螺旋組成的。其作用是將光源經反光鏡反射來的光線聚焦於樣品上，以得到最強的照明，使物象獲得明亮清晰的效果。
（3）物鏡
物鏡的種類很多，可從不同角度來分類：
根據物鏡前透鏡與被檢物體之間的介質不同，可分為：
①幹燥係物鏡 以空氣為介質，如常用的 40×以下的物鏡，數值孔徑均小於 1。
②油浸係物鏡 常以香柏油為介質，此物鏡又叫油鏡頭，其放大率為 90×—100×，數值孔徑值NA大於 1。
根據物鏡放大率的高低，可分為：
①低倍物鏡 指 10×以下；
②中倍物鏡 指 20×；
③高倍物鏡 指 40×—65×；
④油浸物鏡 指 90×以上。
（4）目鏡 目鏡的作用是把物鏡放大了的實像再放大一次，並把物像映入觀察者的眼中。普通光學顯微鏡的目鏡通常由兩塊透鏡組成，上端的一塊透鏡稱“接目透鏡”，下端的透鏡稱“聚透鏡”。上下透鏡之間或在兩個透鏡的下方，裝有由金屬製的環狀光闌或叫“視場光闌”。
（二）光學顯微鏡的成像原理
顯微鏡的放大是通過透鏡來完成的，單透鏡成像具有像差，影響像質。由單透鏡組合而成的透鏡組相當於一個凸透鏡，放大作用更好。
實驗器材
釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢杆菌。
0.1%呂氏美藍染液。
顯微鏡；載玻片；蓋玻片；液體石蠟；擦鏡液等。
實驗步驟
（一）觀察前的準備
1．顯微鏡從顯微鏡櫃或鏡箱內拿出時，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩地將顯微鏡搬運到實驗桌上。
2．將顯微鏡放在自己身體的左前方，離桌子邊緣約 10cm左右，右側可放記錄本或繪圖紙。
3．調節光照，將 10×物鏡轉入光孔，將聚光器上的虹彩光圈打開到最大位置，用左眼觀察目鏡中視野的亮度，轉動反光鏡，使視野的光照達到最明亮最均勻為止。
（二）酵母菌、枯草芽孢杆菌水浸片的製作
1．在載被片中央加一滴 0.1%美藍染色液 （生理鹽水），液滴不可過多或過少，以免蓋上蓋玻片時，溢出或留有氣泡。然後按無菌操作法取培養了 48小時的啤酒酵母（培養了 16小時的枯草芽孢杆菌）少許，放在美藍染色液（生理鹽水）中，使菌體與染色波均勻混合。
2．取蓋玻片一塊，小心地蓋在液滴上，不能將蓋玻片平放下去，應先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然後將整個蓋玻片慢慢放下，這樣可以避免產生氣泡。
（三）低倍鏡觀察
將標本片放置在載物台上，用標本夾夾住，移動推動器，使被觀察的標本處在物鏡正下方，轉動粗調節旋鈕，使物鏡調至接近標本處，用目鏡觀察並同時下降載物台，直至物像出現，再用細調節旋鈕使物像清晰為止。用推動器移動標本片，找到合適的目的像並將它移到視野中央進行觀察。
（四）高倍鏡觀察
在低倍鏡下找到合適的觀察目標並將其移至視野中心後，輕輕轉動物鏡轉換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調節後微調細調節器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察並記錄所觀察到的結果。
（五）油鏡觀察
1．先用粗調節旋鈕將鏡筒提升（或將載物台下降）約 2cm，並將高倍鏡轉出。
2．在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。
3．從側麵注視，用粗調節旋鈕將載物台緩緩地上升，使油浸物鏡浸入香柏油中，使鏡頭幾乎與標本接觸。將聚光器升至最高位置並開足光圈，調節照明使視野的亮度合適，用粗調節器將載物台徐徐上升，直至視野中出現物像並用細調節器使其清晰準焦為止。
4．觀察完畢，下降載物台，將油鏡頭轉出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙醚酒精混合液（乙醚 2份，純酒精 3份）或二甲苯，擦去鏡頭上殘留油跡，最後再用擦鏡紙擦拭 2—3下即可，（注意向一個方向擦拭）。
5．將各部分還原，轉動物鏡轉換器，使物鏡頭不與載物台通光孔相對，而是成八字形位置，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，再將載物台下降至最低，用一個幹淨手帕將接目鏡罩好，以免目鏡頭沾汙灰塵。最後用柔軟紗布清潔載物台等機械部分，然後將顯微鏡放回櫃內或鏡箱中。
實驗結果及討論
1．實驗結果
(1) 繪出酵母菌、枯草芽孢杆菌形態圖。
(2) 鑒別酵母菌的死活。
2．討論
針對實驗原理、步驟、現象進行討論。
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