實驗目的
1.複習顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術;
2.了解油浸係物鏡的基本原理;
3.掌握油浸係物鏡的使用方法。
實驗內容
1.學習油浸係物鏡的使用方法。
2.用壓滴法觀察酵母菌、枯草芽孢杆菌活菌。
實驗原理
(一)顯微鏡的構造
1.顯微鏡的機械裝置
(1)鏡座和鏡臂 它們是顯微鏡的基本骨架,起穩固和支持顯微鏡的作用。
(2)鏡筒 鏡筒上接接目鏡,下接轉換器,形成接目鏡與接物鏡(裝在轉換器下)間的暗室。
(3)物鏡轉換器 物鏡轉換器上可安裝 3—4個接物鏡,可以按需要將其中的任何一個接物鏡和鏡筒接通,與鏡筒上麵的接目鏡構成一個放大係統。
(4)載物台 用於安放玻片。載物台中央有一孔,為光線通路。在台上裝有彈簧標本夾和推動器,其作用為固定或移動標本的位置,使得鏡檢對象恰好位於視野中心。
(5)推動器 是移動標本的機械裝置。
(6)調焦裝置 即粗螺旋和細螺旋,是移動鏡筒調節接物鏡和標本間距離的機件。
2.顯微鏡的光學係統
(1)反光鏡 由一平麵和另一凹麵的鏡子組成,可以將投射在它上麵的光線反射到聚光器透鏡的中央,照明標本。
(2)聚光器 在載物台下麵,它是由聚光透鏡、虹彩光圈和升降螺旋組成的。其作用是將光源經反光鏡反射來的光線聚焦於樣品上,以得到最強的照明,使物象獲得明亮清晰的效果。
(3)物鏡
物鏡的種類很多,可從不同角度來分類:
根據物鏡前透鏡與被檢物體之間的介質不同,可分為:
①幹燥係物鏡 以空氣為介質,如常用的 40×以下的物鏡,數值孔徑均小於 1。
②油浸係物鏡 常以香柏油為介質,此物鏡又叫油鏡頭,其放大率為 90×—100×,數值孔徑值NA大於 1。
根據物鏡放大率的高低,可分為:
①低倍物鏡 指 10×以下;
②中倍物鏡 指 20×;
③高倍物鏡 指 40×—65×;
④油浸物鏡 指 90×以上。
(4)目鏡 目鏡的作用是把物鏡放大了的實像再放大一次,並把物像映入觀察者的眼中。普通光學顯微鏡的目鏡通常由兩塊透鏡組成,上端的一塊透鏡稱“接目透鏡”,下端的透鏡稱“聚透鏡”。上下透鏡之間或在兩個透鏡的下方,裝有由金屬製的環狀光闌或叫“視場光闌”。
(二)光學顯微鏡的成像原理
顯微鏡的放大是通過透鏡來完成的,單透鏡成像具有像差,影響像質。由單透鏡組合而成的透鏡組相當於一個凸透鏡,放大作用更好。
實驗器材
釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢杆菌。
0.1%呂氏美藍染液。
顯微鏡;載玻片;蓋玻片;液體石蠟;擦鏡液等。
實驗步驟
(一)觀察前的準備
1.顯微鏡從顯微鏡櫃或鏡箱內拿出時,要用右手緊握鏡臂,左手托住鏡座,平穩地將顯微鏡搬運到實驗桌上。
2.將顯微鏡放在自己身體的左前方,離桌子邊緣約 10cm左右,右側可放記錄本或繪圖紙。
3.調節光照,將 10×物鏡轉入光孔,將聚光器上的虹彩光圈打開到最大位置,用左眼觀察目鏡中視野的亮度,轉動反光鏡,使視野的光照達到最明亮最均勻為止。
(二)酵母菌、枯草芽孢杆菌水浸片的製作
1.在載被片中央加一滴 0.1%美藍染色液 (生理鹽水),液滴不可過多或過少,以免蓋上蓋玻片時,溢出或留有氣泡。然後按無菌操作法取培養了 48小時的啤酒酵母(培養了 16小時的枯草芽孢杆菌)少許,放在美藍染色液(生理鹽水)中,使菌體與染色波均勻混合。
2.取蓋玻片一塊,小心地蓋在液滴上,不能將蓋玻片平放下去,應先將蓋玻片的一邊與液滴接觸,然後將整個蓋玻片慢慢放下,這樣可以避免產生氣泡。
(三)低倍鏡觀察
將標本片放置在載物台上,用標本夾夾住,移動推動器,使被觀察的標本處在物鏡正下方,轉動粗調節旋鈕,使物鏡調至接近標本處,用目鏡觀察並同時下降載物台,直至物像出現,再用細調節旋鈕使物像清晰為止。用推動器移動標本片,找到合適的目的像並將它移到視野中央進行觀察。
(四)高倍鏡觀察
在低倍鏡下找到合適的觀察目標並將其移至視野中心後,輕輕轉動物鏡轉換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調節後微調細調節器使物像清晰,利用推進器移動標本仔細觀察並記錄所觀察到的結果。
(五)油鏡觀察
1.先用粗調節旋鈕將鏡筒提升(或將載物台下降)約 2cm,並將高倍鏡轉出。
2.在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。
3.從側麵注視,用粗調節旋鈕將載物台緩緩地上升,使油浸物鏡浸入香柏油中,使鏡頭幾乎與標本接觸。將聚光器升至最高位置並開足光圈,調節照明使視野的亮度合適,用粗調節器將載物台徐徐上升,直至視野中出現物像並用細調節器使其清晰準焦為止。
4.觀察完畢,下降載物台,將油鏡頭轉出,先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油,再用擦鏡紙蘸少許乙醚酒精混合液(乙醚 2份,純酒精 3份)或二甲苯,擦去鏡頭上殘留油跡,最後再用擦鏡紙擦拭 2—3下即可,(注意向一個方向擦拭)。
5.將各部分還原,轉動物鏡轉換器,使物鏡頭不與載物台通光孔相對,而是成八字形位置,降下聚光器,反光鏡與聚光器垂直,再將載物台下降至最低,用一個幹淨手帕將接目鏡罩好,以免目鏡頭沾汙灰塵。最後用柔軟紗布清潔載物台等機械部分,然後將顯微鏡放回櫃內或鏡箱中。
實驗結果及討論
1.實驗結果
(1) 繪出酵母菌、枯草芽孢杆菌形態圖。
(2) 鑒別酵母菌的死活。
2.討論
針對實驗原理、步驟、現象進行討論。
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