(1)間接ELISA(1ELISA)
我國現已建立了間接ELISA方法,但目前應用還較少。間接ELISA試驗中,多是以光滑型脂多糖(sLPS)作為抗原的,這些方法大多已通過田間試驗並得到了驗證,並正在被廣泛應用。lELISA高度敏感,但不能鑒別牛種布氏杆菌19號疫苗接種所產生的抗體。不同的間接ELISA試驗程序都比較相似,脂多糖抗原包被ELISA板,PBST洗滌後加入待檢血清,再依次加入酶標二抗、底物和終止液,用酶標儀測光密度值並判定結果。ELISA常用反應率來判定結果,即樣品OD值/陽性對照OD值×100%。
間接ELISA在檢測感染牛時其敏感性等於或大於BBAT,在檢測未免疫的牛時其特異性與CFT相同。根據所設定的臨界值不同,在檢測免疫牛時其特異性可能會低於CFT。
(2)競爭ELISA
我國目前還未見有布氏杆菌病競爭ELISA試驗的報道。該方法應用了單克隆抗體,其特異性明顯高於間接ELISA。競爭ELISA可以排除牛種布氏杆菌19號疫苗所產生抗體的影響。其試驗程序首先為包被脂多糖抗原,PBST洗滌後加入單克隆抗體(M84),再立即加入待檢血清,溫育後再加入酶標羊抗鼠IgG,然後依次加入底物和終止液,用酶標儀測光密度值並判定結果。其結果常采用反應率來判定。
競爭ELISA在檢測感染牛時其敏感性等於或大於凝集試驗,與間接ELISA相當。在檢測未免疫牛時,其特異性等於或大於CFT和間接ELISA。在檢測牛種布氏杆菌”號近期免疫牛時,其特異性會低一些.但在檢測過往免疫動物時,其特異性要顯著升高。
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