1、L-穀氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
L-穀氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基後,L-穀氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-穀氨酰胺在溶液中經過一段時間後會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-穀氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對於一些細胞具有毒性。
2、哪種培養基中可以省去加酚紅?
酚紅在培養基中用作PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由於酚紅幹擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。
3、二價離子抑製胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什麽?
二價離子的確抑製胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合遊離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑製胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養基中所有的二價離子。
4、培養基中丙酮酸鈉的作用是什麽?
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源,盡管細胞更傾向於以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
5、室溫下配製的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?
緩衝液PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃時,不同PH值。 50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃時,不同PH值 4°C 25°C 37°C 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 8.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5
6、在Sf9, Sf21, 和high Five細胞懸浮培養時,肝素的使用量是多少?
為了防止懸浮培養細胞聚集的形成,使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。
7、在重新凍存sf9細胞前,它可以傳多少代?
隨著傳代的次數的增加,它的感染能力會降低嗎? 通常情況當細胞經過30次傳代後,應該返回凍存。無論什麽時候計數時,都應該檢查細胞活力。如果超過95%的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,它們的感染力將不在是有效的。
8、貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基,在放置幾天後顏色變紫?
這主要是由於在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前鬆開瓶口,在CO2培養箱孵育培養基10-15分鍾,來校正溶液的pH值(確定鬆開瓶口以保證氣體交換)
9、為什麽要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?
胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鍾,就會變得不穩定。 保存血清最好的方法? 我們建議血清應保存在-5℃至-2O℃。若存放於4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
10、血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現,該如何處理?
血清中沉澱物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由於血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍後,也會存在於血清中,亦是造成沉澱物的原因之一。但這些絮狀沉澱物,並不影響血清本身的質量。 若欲去除這些絮狀沉澱物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。最好不使用過濾的方法去除這些絮狀沉澱物,因為它可能會阻塞過濾膜。 為什麽要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體係統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
11、為什麽儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉澱?
有些胎牛血清產品沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反複凍融。
12、怎樣避免沉澱物的產生?
我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作: (1)解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),非常容易產生沉澱物。 (2)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生。 (3)請勿將血清置於37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。 (4)血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。 (5)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉澱物的增多。
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