1、樣品處理：取25g固體（或25mL液體）檢樣加入225mL滅菌生理鹽水，製成混懸液。
2、吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線於血平板（如檢樣汙染嚴重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯），36℃培養24h，接種血平板，36℃培養24h,挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，觀察在液體和固體中的培養特征、溶血情況及革蘭氏染色、形態，並進行鏈激酶試驗和杆菌肽敏感試驗。
3、鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36℃肉浸液肉湯培養物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置於36℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如24h後不溶解即為陰性。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。
4、杆菌肽敏感試驗：取典型菌落的菌液塗布於血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單位的杆菌肽紙片置於上述平板上，36℃培養18-24h，如有抑菌圈出現即為陽性。用已知的陽性菌株做對照。
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