1 標準菌株的複活
標準菌株一般為安培裝凍幹粉劑,依照隨產品附有的菌種複活方法,以及《人間傳 購回的標準菌株 標準菌株 染病微生物分類目錄》和《實驗室生物安全通用要求》,在相應的生物安全水平下,開啟包裝。用 75%酒精棉球擦拭安培瓶上部,可用砂輪或銼刀在安培瓶上部劃一小痕跡,用無 菌紗布包住安培瓶,兩手分別捏住安培瓶上下兩端,稍向外用力便可打開安培瓶。 依據菌株特性選擇合適的培養基和培養條件,用無菌吸管吸適量的液體培養基加到凍幹塊 上,吹打混勻成懸液,將全部懸液移入含有 5ml 合適的液體培養基中,將管中殘留的幾滴懸 液移種到斜麵上,適宜的溫度培養一定的時間。觀察生長狀況,可適當延長培養時間。
2 菌株的性能確認
2.1 純度檢查 菌落形態 取複活後的培養物, 在相應的鑒別平板或非選擇平板上劃線分離, 培養出單菌落, 觀察菌落形態是否符合該菌株要求,同一平板上的單菌落大小,形狀、顏色、質地、光澤是 否相似, 對於出現兩種以上形態的菌株, 應再分別挑取單菌落劃線, 檢測是否出現相同特征。
2.2 細胞形態 取劃線平板上的單菌落,革蘭氏染色反應應符合要求,且呈現一致性。
2.3 生化鑒定 必要時進行生化鑒定
2.4 汙染處理 如發現菌株有汙染, 挑選目標菌培養成功後, 將培養物滅菌銷毀 (121℃30min)
3 菌株的傳代
3.1 標準儲備菌株的製備 標準儲備菌株是在經多次傳代後製備的多份相同的菌株。 將複活後經過性能確認的菌株的斜麵培養物,用 0.85%的滅菌生理鹽水 0.5ml 洗斜麵菌苔成 菌懸液 將上述菌懸液吸入滅菌管中,加入 0.5ml40%的滅菌甘油,混勻,密封。保藏溫度為—18℃
3.2 工作菌株的製備 由凍幹或超低溫保存的標準儲備菌株經一次傳代得到的菌株。 工作菌株不宜再傳代, 工作菌 株使用和儲存過程中嚴格遵守無菌操作,即不存在交叉汙染,可以多次使用。保藏溫度為 4-6℃
3.3 製備好的菌株應由室主任統一編號,標識,專人專櫃保藏。
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