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致瀉性大腸埃希氏菌——快速酶觸反應



錄入時間:2012-2-17 14:01:42 來源:互聯網

    致瀉性大腸埃希氏菌能使人類致病,監診表現主要為嚴重腹瀉,多數表現為敗血症。根據血清型別、毒力和所致臨床症狀可分為產腸毒素性大腸埃希氏菌(ETEC)、腸致病性大腸埃希氏菌(EPEC)、腸侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)、腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)以及腸粘附性大腸埃希氏菌(EAEC)五類。

    快速酶觸反應:

    大腸埃希氏菌具β-葡萄糖醛酸酶,但以O157:H7為代表的腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)卻不具此酶。


    毒素及毒力因子檢測:包括LT、ST、Hly、SLT、Stx、EaeA、VT、EAST等,過去多用動物或細胞培養測定,現可用其單抗以多種免疫學手段檢出,也可用基因探針技術或PCR等分子生物學技術檢測。同時檢測Hly和SLT基因,能快速檢測和鑒定EHEC菌株,並與EPEC區分開來。


    基因探針和PCR技術:國內徐建煙根據溶血素hlyAB基因序列設計了鑒定EHEC的特異DNA探針,敏感性特異性達99%。Fortin將套式PCR技術和熒光探針技術相結合來檢測O157,該方法不僅可以鑒定與O157抗血清有交叉反應的菌株,而且靈敏度高,可檢測牛奶和蘋果汁中102CFU/ml,的細菌,如果先進行6h增菌,可檢測1CFU/ml的細菌。
基因芯片:Chizhikov將6個編碼大腸杆菌細菌抗原和毒力的特異基因探針(EaeA,SltI,SltII,FliC,RfbE,IpaH)點樣在玻片上,取多重PCR擴增產物與之雜交,用於同時檢測和鑒定食物中毒相關的腸道病原體,該芯片可同時檢測15種沙門菌、誌賀菌和大腸杆菌的毒力因子。


    細胞粘附試驗:傳統的細胞粘附試驗是檢測EIEC的標準方法。方法為在24孔板的孔中圓形玻片上培養的HEP-2細胞單層,生長致50%;待檢菌以L肉湯培養,37℃,靜止培養16h;每孔加入20ul菌液(含2×107個菌),置37℃,5%CO2溫育3h,培養液中含1%α-甲基-D-甘露醇;Hank’s平衡鹽溶液洗培養板3次;70%乙醇固定,10%Giema染色,取出圓形玻片,置載玻片上,油鏡觀察。

 

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