第一，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。將蛋白質抗原按分子大小和所帶電荷的不同分成不同的區帶；
第二，電轉移。目的是將凝膠中己分離的條帶轉移至硝酸纖維素膜上；
第三，酶免疫定位，該步的意義是將前兩步中己分離，但肉眼不能見到的抗原帶顯示出來。
將印有蛋白抗原條帶的硝酸纖維素膜依次與特異性抗體和酶標記的第二抗體反應後，再與能形成不溶性顯色物的酶反應底物作用，最終使區帶染色。本法綜合了SDS-PAGE的高分辨率及ELISA的高敏感性和高特異性，是一種有效的分析手段，在蛋白質化學中應用廣泛，既可用於分析抗原組分及其免疫活性，也可用於疾病的診斷。免疫印證實踐中最早的應用是HIV感染的血清學診斷。病毒感染細胞或可溶性病毒、細菌材料等都可以采用免疫印跡方法檢測。
