蘋果的花粉培養
(一)選取小孢子處於單核期的花蕾枝條。小孢子單核期的花芽外部形態特征是:花芽已充分開放,有4~5片葉完全展開,中心花蕾吐紅,周圍花蕾明顯增大,但花序尚未分離。
(二)把花蕾插入水中,放在1~3℃的冰箱上預處理。
(三)摘取花蕾,在70%的酒精浸約半分鍾,再在10%漂白粉上清液中浸15~20min,無菌水衝洗3~5次。
(四)胚狀體的誘導。從花蕾中取出花藥,接種到MS+0.4mg∕L2,4-D+0.2 mg∕L KIN+4 mg∕L IAA+3~8%蔗糖的固體培養基上培養,每瓶30~50個花藥。在25~30℃下培養70d後,由變褐的花藥裂口處開始產生胚狀體。
(五)無根苗的誘導。 把產生胚狀體的花藥接種到MS+0.5 mg∕L IBA+0.1 mg∕L GA3+1 mg∕L BA+3~5%蔗糖的固體培養基上培養,在25~30℃和光照10h下,約經40~100d以上,胚狀體可形成次生胚狀體或叢生芽,進而發育成無根苗。
(六)根係的誘導。切取無根苗,轉接到1∕2MS+1.5 mg∕L IAA+15~2%蔗糖的固體培養基上培養。約經15~20d,小苗莖基部長出根,形成完整植株。也可用50~100 mg∕L IBA溶液浸泡苗梢基部15~30 min,再插入無生長素的培養基上,也能較順利地誘導生根。
(七)花粉植株的移栽。在春、秋季盆栽,保持15~20℃和高空氣濕度,一般可使成活率達到40%以上。
(八)對有些不易生根和提早開花的植株,可用嫁接法進行繁殖。
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