臨床非培養標本的采集及處理操作程序
1 目的：規範臨床待檢標本的正確采集、送檢和處理。
2 適用範圍：微生物檢驗實驗室的所有臨床檢測標本。
3 職責：
3.1 所有采集標本的人員均需按本SOP 操作，實驗室工作人員有責任向臨床醫生、護士或病人
宣教。
3.2 本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP 的工作人員提出，並報經下述人員批準簽字：
室負責人、科主任。
4 操作程序
4.1 本實驗室檢測標本為：血清或血漿、痰、生殖道拭子標本、尿液及腦脊液和胸腹水。
4.2 做好標本簽收，核對檢驗單與標本標簽是否清楚無誤，送檢標本是否正確、合格，給所有標
本按順序編號，按如下操作規程操作。
4.3 查找抗酸菌操作:將標本置於水浴蒸箱加溫殺菌30 分鍾，取標本殘留物或沉澱物加溫塗布玻
片，液性標本以3000 轉/分鍾離心5 分鍾，取標本殘留物或沉澱物加溫塗布玻片並標注編號後
固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加溫(用酒精燈在玻片下來回加溫置染色液冒熱氣，
但無氣泡產生為宜)染色10 分鍾，自來水衝洗淨染液，以硫酸美蘭複染2 分鍾，水洗涼幹。
鏡檢與報告：油鏡下查找分枝、不規則紅色杆菌，按如下標準進行結果報告。
1)、鏡檢100-300 個視野（時間不少於4 分鍾）未發現抗酸菌，繼續觀察至300 個視野仍未發
現抗酸菌者報告抗酸菌（—）；
2)、鏡檢100 個視野找到抗酸菌1-2 條者，報告抗酸菌可疑（±），或重塗片或重送標本檢查；
3)、鏡檢100 個視野找到抗酸菌3-9 條者，報告抗酸杆菌陽性（＋）；
4)、鏡檢10 個視野找到抗酸菌1-9 條者，報告抗酸杆菌陽性（2＋）；
5)、鏡檢每個視野找到抗酸菌1-9 條者，報告抗酸杆菌陽性（3＋）；
6)、鏡檢每個視野找到抗酸菌多於9 條者，報告抗酸杆菌陽性（4＋）。
4.4 查找普通細菌操作：液性標本取離心沉澱物塗片，拭子或膿性標本直接塗布玻片並標注編號
後固定。同時取大腸標準株(ATCC25922)和金黃色葡萄球菌標準株（ATCC25922）塗片，一起行
革蘭氏染色，先滴加第一液染色1 分鍾，水洗，加第二液媒染1 分鍾，水洗幹淨；以95%酒精
脫色30 秒鍾後立即水洗，再加第四液複染30 秒鍾，水洗後涼幹。油鏡下查找菌體並觀察球杆
比例；觀察質控菌是否合格。
4.5 墨汁染色查找隱球菌：液性標本離心取沉澱物塗片，膿性或拭子標本直接塗片並寫號，以無
菌接種環粘取少量印度墨汁與玻片上標本混勻，壓蓋玻片，先低倍鏡下找到視野再轉離倍鏡觀察。
若找到透亮，圓形強折光，有厚莢膜的菌體報告墨汁染色陽性；否則報告陰性。
4.6 白帶常規檢查：鹽水管直接將棉簽點至玻片後以高倍鏡檢有無滴蟲；塗片標注編號後固定，
行革蘭氏染色，先滴加第一液染色1 分鍾，水洗，加第二液媒染1 分鍾，水洗幹淨；以95%酒
精脫色30 秒鍾後立即水洗，再加第四液複染30 秒鍾，水洗涼幹後鏡檢查找革蘭氏陰性雙球菌、
黴菌或陽性球菌、線索細胞等。陰道清潔度的按如下判斷標準報告：
Ⅰ度：陰道杆菌為主，並可見大量上皮細胞。
Ⅱ度：有部份陰道杆菌，但亦有部份膿細胞和雜菌，上皮細胞少見。
Ⅲ度：僅見少量陰道杆菌和上皮細胞，有大量膿細胞和雜菌。
Ⅳ度：鏡下無陰道杆菌，除少量上皮細胞外，主要的幾乎全是膿細胞和大量雜菌。
4.7 肥達試驗：標本標明編號，以3000 轉/分鍾離心5 分鍾；取試管架，按每標本排5 排試管，
每排5 支；各標本用加樣器取100μl 血清置於一支稀釋用試管(注明檢驗號)中，加入1.9ml 0.9%
生理鹽水混勻，第一排加入1：20 倍稀釋血清各0.2ml，成1：40 倍；後稀釋管再加入1.0ml 0.9%
生理鹽水，成1：40 倍稀釋，加入第二排試管各0.2 ml。同樣方法對倍稀釋至第四排試管，第
五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對照。從冰箱中拿出肥達反應試驗稀釋菌懸液，第一列
各加入H 診斷菌液0.2 ml,第二列各加入O 診斷菌液0.2 ml，第三列各加入甲型診斷菌液0.2 ml,
第四列各加入乙型診斷菌液0.2 ml, 第五列各加入丙型診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱
18-24 小時。
結果判斷：菌體沉澱至試管底成圓點為陰性管，出現散在顆粒狀凝集為陽性管。以最高稀釋管出
現散在顆粒狀凝集為報告滴度。若陰性對照出現凝集則需重新稀釋配製診斷菌懸液重做試驗。
4.8 外菲氏試驗：標本標明編號，以3000 轉/分鍾離心5 分鍾；取試管架，按每標本排3 排試
管，每排5 支；各標本用加樣器取100μl 血清置於一支稀釋用試管(注明檢驗號)中，加入1.9ml
0.9%生理鹽水混勻，第一排加入1：20 倍稀釋血清各0.2ml，成1：40 倍；稀釋管留1.0ml 再
加入1.0ml 0.9%生理鹽水，成1：40 倍稀釋，加入第二排試管各0.2 ml。同樣方法對倍稀釋至
第四排試管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對照。從冰箱中拿出外菲氏反應試驗稀
釋菌懸液，第一列各加入OX19 診斷菌液0.2 ml,第二列各加入OX2 診斷菌液0.2 ml，第三列各
加入OXK 診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱18-24 小時。
結果判斷：菌體沉澱至試管底成圓點為陰性管，出現散在顆粒狀凝集為陽性管。以最高稀釋管出
現散在顆粒狀凝集為報告滴度。若陰性對照出現凝集則需重新稀釋配製診斷菌懸液重做試驗。
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