1.形態與染色：為革蘭陰性短杆菌，（1.0～3.0）μm×（0.4～0.7）μm.多數有周鞭毛，能運動。有菌毛、莢膜及微莢膜。
2.培養特性：兼性厭氧菌，營養要求不高，在普通營養肉湯中呈渾濁生長。普通營養瓊脂上呈灰白色的光滑型菌落。血瓊脂平板上，少數菌株產生溶血環。在伊紅美藍瓊脂上，由於發酵乳糖，菌落呈藍紫色並有金屬光澤。麥康凱和SS瓊脂中的膽鹽對其有抑製作用，耐受菌株能生長並形成粉紅色菌落。
3.生化反應：吲哚、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽試驗（IMViC試驗）為++--（腸杆菌屬多為--++）。克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）上斜麵和底層均產酸產氣，H2S陰性。動力、吲哚、尿素（MIU）培養基的生化反應為++-.
4.抗原結構：大腸埃希菌的抗原由菌體抗原（O）、表麵抗原（K）和鞭毛抗原（H）三種構成。現已知有171種O抗原，100種K抗原和56種H抗原。一個菌株的抗原類型由特殊的0、K和H抗原的代碼表示，其血清型別的方式是按O:K:H排列，例如O111:K58（B4）:H2.
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